Інноваційні методи збирання для широкомасштабного синтезу генів

Технологія збирання для синтезу великих фрагментів ДНК з нуля є наріжним каменем синтезу генів, охоплюючи такі методи, як BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, збірка Gibson, CPEC і Overlap PCR. Через обмеження поточної технології точного синтезу ДНК генної довжини в одну стадію необхідно поєднувати методи складання in vitro та in vivo для збирання олігонуклеотидних фрагментів, синтезованих у сегментах, у довгі фрагменти ДНК.

Техніка складання in vitro

Вони класифікуються на різні методи на основі розміру фрагмента та характеристик послідовності, із загальною вимогою до використання інструментальних ферментів. ПЛР з перекриттям, заснована на методі ДНК-полімерази, проста і швидка в роботі. Методи BioBrick і BglBrick, які покладаються на ізошизомери, забезпечують стандартизоване збирання, хоча метод BioBrick не підходить для злитих білків. Метод клонування Golden Gate, заснований на рестриктазах типу IIS, забезпечує ефективне безшовне лігування кількох фрагментів. Метод збирання Гібсона, який використовує комбінацію декількох інструментальних ферментів, забезпечує безшовне лігування з розміром фрагментів, що досягає кількох сотень кб. Стандартизований дизайн компонентів ДНК підвищує швидкість використання наявних фрагментів.

Техніка складання in vivo

хоча пробірці розмір зібраних фрагментів може досягати кількох сотень кб, вихід часто недостатній, що вимагає ампліфікації за допомогою таких організмів, як Кишкова паличка. Для збирання фрагментів, розмір яких перевищує 20 кб, часто використовуються рекомбінантні системи в організмах, включаючи Bacillus subtilis, дріжджі та сконструйовані бактерії. Дріжджі, як зазвичай використовуваний хазяїн, були визнані своєю ефективною здатністю до гомологічної рекомбінації протягом багатьох років. Його можна використовувати для складання штучних хромосом довжиною до кількох мегабаз (Mb). Крім того, Saccharomyces cerevisiae демонструє надзвичайну толерантність до довжини хромосом, що є теоретичною основою для використання дріжджів для побудови наддовгих хромосом у вищих організмах.

додатків

Yaohai Bio-Pharma в основному використовує два методи збирання для синтезу генів: збирання лігази та збирання ДНК-полімерази. Лігазний метод збірки з’єднує перекриваючі та гібридизовані 5’-фосфорильовані олігонуклеотидні фрагменти в дволанцюгову ДНК за допомогою ДНК-лігази. Метод полімеразної збірки використовує ДНК-полімеразу для подовження перекриваючихся олігонуклеотидних фрагментів шляхом гібридизації, отримання суміші різної довжини та, нарешті, ампліфікації успішно зібраних повнорозмірних фрагментів за допомогою праймерів. Yaohai може допомогти клієнтам задовольнити певні потреби в синтезі генів.

Ми також активно шукаємо інституційних або індивідуальних глобальних партнерів. Ми пропонуємо найконкурентнішу компенсацію в галузі. Якщо у вас виникли запитання, зв’яжіться з нами: [email protected]