Інноваційні технології збірки для великого масштабу синтезу генів

Технологія збірки для синтезу великіх фрагментів ДНК з нуля є основою генетичного синтезу, включаючи методи, такі як BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson assembly, CPEC та Overlap PCR. Завдяки обмеженням сучасної технології точного синтезу ДНК генової довжини за один крок необхідно поєднувати техніки in vitro та in vivo для збірки олигонуклеотидних фрагментів, синтезованих у сегментах, у великі фрагменти ДНК.

Техніки збірки in vitro

Їх класифікують на різні методи залежно від розміру фрагмента та характеристик послідовності, при цьому загальна вимога полягає в використанні інструментальних ензимів. Overlap PCR, який базується на методі DNA полімерази, є простим і швидким у виконанні. Методи BioBrick та BglBrick, які залежать від ізосхізомерів, дозволяють стандартне збірку, хоча метод BioBrick не підходить для фузійних протеїнів. Метод клонування Golden Gate, який базується на типі IIS обмежувальних ензимів, дозволяє ефективне безшовне лигування кількох фрагментів. Метод Gibson assembly, який використовує комбінацію кількох інструментальних ензимів, дозволяє безшовне лигування з розміром фрагментів до декількох сотень kb. Стандартизований дизайн компонентів DNA покращує коефіцієнт використання існуючих фрагментів.

Техніки збірки in vivo

Хоча у vitro розмір збірних фрагментів може досягати декількох сотень kb, часто продуктивності недостатньо, що необхідно сприяти за допомогою організмів, таких як Escherichia coli. При збірці фрагментів, що перевищують 20 кб, часто використовуються рекомбінаційні системи у організмах, включаючи Bacillus subtilis, дріжджі та інженерні бактерії. Дріжджі, як поширений хост, давно визнані за своєю ефективною гомологічною рекомбінацією. Вони можуть використовуватися для збірки штучних хромосом довжиною кілька мегабаз (Mb). Крім того, Saccharomyces cerevisiae відзначається надзвичайною толерантністю до довжини хромосом, що дає теоретичну основу для використання дріжджів при створенні сверхдовгих хромосом у вищих організмах.

Заявки

Yaohai Bio-Pharma головним чином використовує два методи збірки при синтезі генів: з'єднання лігазою та з'єднання ДНК-полімеразою. Метод лігазового з'єднання з'єднує накладні та гібридизовані 5'-фосфатовані олигонуклеотидні фрагменти у двозначну ДНК за допомогою ДНК-лігази. Метод полімеразної збірки використовує ДНК-полімеразу для продовження накладних олигонуклеотидних фрагментів через гібридизацію, отримуючи суміш різної довжини, і, нарешті,.amplifying успішно змонтовані повнодовжні фрагменти за допомогою праймерів. Yaohai може допомогти клієнтам задовольнити специфічні вимоги при синтезі генів.

Ми також активно шукаємо глобальних партнерів серед установ або окремих осіб. Ми пропонуємо найбільш конкурентоспроможну компенсацію в галузі. Якщо в вас є будь-які питання, будь ласка, не соромтеся звертатися до нас: [email protected]