мРНК синтезується за допомогою транскрипції in vitro (IVT) з лінеаризованої плазмідної ДНК (пДНК). Деякі побічні продукти також утворюються під час процедури IVT, у тому числі дволанцюгова РНК (dsRNA), визначена як головні тригери для вродженого імунного шляху. Важливо видалити домішки та отримати високі врожаї чиста мРНК для досліджень мРНК in vitro/vivo та терапевтичного застосування.
Компанія Yaohai Bio-Pharma розробила набір технологій синтезу мРНК високочиста мРНК, такі як розробка та оптимізація послідовності, IVT, очищення, ліофілізація та інкапсуляція ліпідних наночастинок (LNP). Вся продукція випускається за суворими стандартами контролю якості. Афінна хроматографія (AC), заснована на сильній і селективній взаємодії між 3' polyA хвостом мРНК із стаціонарною фазою оліго dT, є ефективною та масштабованою стратегією очищення мРНК.
Очікувані результати
| Продукт |
Індивідуальна високочиста мРНК
|
| довжина |
100~10,000 нуклеотидів |
| Вміст РНК |
100 мкг ~ 10 мг (OD260) |
| Чистота |
A260 / A280 |
| Ідентифікація та чистота |
Електрофорез у агарозному гелі (AGE)
Капілярний електрофорез (CE)
|
| Buffer
|
Вода, вільна від РНКази (рідина) |
| Доставка |
Судно з сухим льодом; або при температурі навколишнього середовища |
| зберігання |
● Рідина, температура -20°C або нижче
● Ліофілізований порошок, при 4°C
|
| додаток |
Розробка рецептури LNP,
Клітинні аналізи, експерименти на тваринах
|
Інші настроювані параметри
| 5' Cap |
● Невирішений
● Cap0, співзакритий
● Cap1, співзакритий
● Cap1, ферментативне обмеження
|
| 5' UTR/3' UTR |
● Послідовність UTR природи
● Мутантна/сконструйована послідовність UTR
|
| 3' PolyA хвіст |
● 100A ~120A Хвіст (рекомендовано)
● Сегментований поліА хвіст
● Інший нестандартний хвіст
|
| Модифіковані нуклеозиди |
● Немодифіковані основи,
● Псевдоуридин (Ψ),
● N1-метилпсевдоуридин (N1Ψ),
● 5-метилцитозин (m5C),
● 5-метилуридин (m5U),
● 5-метоксиуридин (5moU),
● 2-тіоуридин (s2U),
● 2′-O-метил-U
● інші
|
Вивчення проблеми
Ми розробили процес багатоетапної хроматографічної очистки та підготували мРНК з високою чистотою та цілісністю (>95%).
Рис. Аналіз мРНК з високою чистотою (>98%)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
НЕМАЄ
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
