mRNA синтезується шляхом транскрипції in vitro (IVT) з лінійного плазмідної ДНК (pDNA). Під час процедури IVT також утворюються деякі побутові продукти, включаючи подвійну спіральну РНК (dsRNA), яка ідентифікується як головні тригери для вродженої імунної шляху. Критично важливо видалити незбагнення та отримати високі викиди чистої mRNA для досліджень mRNA in vitro/in vivo та терапевтичних застосувань.
Yaohai Bio-Pharma розробила набір технологій синтезу mRNA для забезпечення високочистою mRNA , таких як проектування та оптимізація послідовності, IVT, очищення, ліофілізація та енкапсуляція у ліпідні наночастинки (LNP). Усі продукти випускаються за строгими стандартами контролю якості. Афінітна хроматографія (AC), що базується на сильному та вибірковому взаємодії між 3′ polyA хвостом mRNA з фіксованим фазовим олиго dT, є ефективною та масштабованою стратегією очищення mRNA.
Результати виконання
| Продукт |
Замовлення Високочистої mRNA
|
| Довжина |
100~10,000 нуклеотидів |
| Зміст RNA |
100 µg~10 mg (OD260) |
| Чистота |
A260/A280 |
| Ідентифікація та чистота |
Електрофорез у агарозному гелі (AGE)
Капілярна електрофорез (CE)
|
| Буфер |
Вода без RNаз (рідина) |
| Відправка |
Доставляти з сухим льодом; або при кімнатній температурі |
| Сховище |
● Рідина, при або нижче -20°C
● Ліофілізований порошок, при 4°C
|
| Застосування |
Розробка формуляції ЛНП,
Клітинні тестування, Дослідження на тваринах
|
Інші налагоджені опції
| 5' Кап |
● Без капа
● Cap0, спільне капування
● Cap1, спільне капування
● Cap1, ензиматичне капування
|
| 5’ UTR/3’ UTR |
● Природна UTR послідовність
● Мутантна/Інженерна UTR послідовність
|
| 3' ПоліА хвіст |
● 100A ~120A Хвіст (рекомендований)
● Сегментований поліА хвіст
● Інший змінений хвіст
|
| Модифіковані нуклеозиди |
● Немодифіковані бази,
● Псевдouriidine (Ψ),
● N1-Метилпсевдouriidine (N1Ψ),
● 5-метилцитозин (m5C),
● 5-метилуридин (m5U),
● 5-метоксуридин (5moU),
● 2-тиоуридин (s2U),
● 2′-O-methyl-U
● Інші
|
Вивчення випадку
Ми розробили багатоетапний хроматографічний процес очищення та підготували mRNA високої чистоти та цілісності (>95%).
Рис. Аналіз mRNA високої чистоти (＞98%)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
