Rekombinant Proteinlerin Kalite Kontrolü ve Uygulamaları

Rekombinant proteinlerin kalite kontrolü, deneysel verilerin güvenilirliği ve tekrarlanabilirliği için hayati önem taşır. Proje tasarımından üretim sürecine kadar her adım, sıkı kalite kontrol stratejileri gerektirir.

Kalite Kontrol Stratejileri

Endüstriyel sektör katı standart işletme prosedürlerine bağlı kalırken, akademik topluluğun veri yeniden üretilebilirliğini iyileştirmek için profesyonel bilgiyi geliştirmesi gerekir. Belirli biyolojik uygulamalara veya biyokimyasal özelliklere sahip proteinler, özel kalite kontrol (KK) stratejileri gerektirir.

Zorlu Örnekler ve Çözümler

Yaohai Bio-Pharma, uzmanlardan oluşan bir ekiple birlikte rekombinant protein üretimi ve saflaştırma konusunda kapsamlı deneyime sahiptir ve protein üretiminizin yüksek saflıkta tamamlanmasını sağlar. Yüzlerce projeden edindiğimiz deneyimden yararlanarak Yaohai, protein saflaştırmanın nasıl optimize edileceğini nazikçe özetler.

Nükleik Asit Bağlayıcı Proteinler: Nükleik asit çıkarma adımları, nükleazlar veya PEI çökeltmesi gibi, gereklidir. Nükleik asit kontaminasyonunu tespit etmek için A260nm/A280nm oranı izlenir.

Kriyo-EM için Fare Ferritin Ağır Zincir 1: Saflaştırma adımlarının optimize edilmesi ve A260nm/A280nm oranını düşürerek protein saflığını garanti altına almak için nükleazların eklenmesi gerekmektedir.

Kimerik Protein İnsan dsRBEC: Hücre lizisi, üre içeren bir tamponun kullanılması ve ardından fonksiyonel olarak aktif proteinlerin elde edilmesi için kolon üzerinde yeniden katlama yapılmasıyla gerçekleştirilir.

İki Değerlikli Katyonları Bağlayan Proteinler: Ekspresyon ve saflaştırma sırasında spesifik iki değerlikli katyonlar eklenmeli ve şelat oluşturucu ajanlardan kaçınılmalıdır.

Demir-Kükürt Proteinleri: [2Fe ± 2S] kümesinin bozulmasını önlemek, protein katlanmasını ve fonksiyonunu doğru şekilde sağlamak için imidazol kullanımından kaçınılmalıdır.

LLT1'in Çözünebilir Parçası: Mutant tasarım, disülfür bağı oluşumunu ve protein katlanmasını optimize ederek kararlı ve yüksek verimli proteinlerin elde edilmesini sağlar.

CLK1 Kinaz Kristalizasyonu: λ-fosfataz ile ortak ifade, fosforilasyon bölgelerinden fosfatları uzaklaştırır ve homojen CLK1'i heterojen fosforilasyon olmadan elde etmek için boyut dışlama kromatografisi (SEC) ve anyon değişim kromatografisi kullanılır.

Antijen Kullanımı İçin Proteinler: Yüksek immünojenik proteinlerle kontaminasyonu önlemek için saflık değerlendirmesi gereklidir. Yapısal epitop antikorları için antijenin üç boyutlu konformasyonu korunmalıdır.

Toplanmaya Eğilimli Proteinler: Agregasyon sorunlarını sınırlamak için farklı suşların taranması ve yetiştirme sıcaklıklarının düşürülmesi gibi stratejiler uygulanmakta ve hızlı saflaştırma stratejileri tasarlanmaktadır.

Endotoksin Giderimi: Pozitif yük kromatografisi ve polikatyon ligand afinite kromatografisi gibi yöntemler endotoksinleri uzaklaştırarak LPS düzeylerinin uygulama limitlerinin altında kalmasını sağlar.

Protein Kompleksleri: Alt birimler ayrı ayrı ifade edilir ve in vitro birleştirilir veya işlevsel kompleksler oluşturmak için birlikte ifade edilir. Kompleks bütünlüğü homojenlik ve mol kütlesi ile değerlendirilir.

Sonuç

Protein üretimi, biyokimyasal özellikler ve uygulamalar göz önünde bulundurularak stratejik tasarımla başlar. İfade, saflaştırma ve QC sırasında koşullar ve yöntemler, kararlılık, kümeleşmeme ve doğal durum için optimize edilir. Saflaştırılmış proteinler, biyofiziksel karakterizasyon gibi çeşitli alt akış kullanımlarına hizmet eder.

Yaohai Bio-Pharma ayrıca aktif olarak kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arıyor ve sektördeki en rekabetçi tazminatı sunuyor. Herhangi bir sorunuz varsa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin: [email protected]