Yeniden Yapılanmış Proteinlerin Kalite Kontrolü ve Uygulamaları

Yeniden yapılanmış proteinlerin kalite kontrolü, deneysel verilerin güvenilirliği ve tekrarlanması açısından kritiktir. Proje tasarımı dan üretim sürecine kadar olan her adımda sert kalite kontrol stratejileri gereklidir.

Kalite Kontrol Stratejileri

Sanayi sektörü sıkı standart işletim prosedürlerine uygundurken, akademik topluluk veri tekrarlanabilirliğini artırmak için profesyonel bilgiyi geliştirmeye ihtiyaç duyar. Belirli biyolojik uygulamalara veya biokimyasal özelliklere sahip proteinler için özel kalite kontrol (QC) stratejileri gerekir.

Zorlu Örnekler ve Çözümler

Yaohai Bio-Pharma, yeniden yapılanmış protein üretiminde ve temizlemede geniş deneyime sahip olup, uzman bir ekip ile yüksek safiyetteki protein üretiminizin tamamlanmasını sağlar. Yüzlerce proje deneyimimizi kullanarak, Yaohai size nasıl protein temizliğini optimize edeceğinizi özetleyerek sunar.

Nükleik Asit-Bağlayıcı Proteinler: Nükleaz veya PEI birleştirme gibi nükleik asit kaldırma adımları gerekli olanaklar. Nükleik asit kirliliğini tespit etmek için A260nm/A280nm oranı izlenir.

Kriyo-EM için Fare Ferritin Ağır Zincir 1: Ayarlanabilir temizleme adımları gereklidir ve nükleazların eklenebilmesi A260nm/A280nm oranını düşürür ve proteinin saf olduğunu garanti eder.

Hibrit Protein İnsan dsRBEC: Hücre lizisi, üre kaplı bir tampon kullanılarak gerçekleştirilir ve ardından fonksiyonel aktif proteinler elde etmek için sütun üzerinde yeniden katlanma yapılır.

Diveysiyon Kationları Bağlayan Proteiner: İfade ve temizleme sırasında özel diveysiyon kationlarının eklenmesi gerekir ve kompleksleyici maddelerin kullanılması önlenmelidir.

Demir-Karbon Proteiner: [2Fe ± 2S] kümesinin bozulmasını önlemek ve doğru protein katlanması ve işlevini sağlamak için imidazın kullanımı önlenmelidir.

LLT1'nin Çözeltilmiş Parçası: Mutant tasarım, disülfid bağı oluşumunu ve protein katmanmasını optimize eder, böylece kararlı ve yüksek verimli proteinler elde edilir.

CLK1 Kinaz Kristalleştirme: Λ-fosfataz ile ortak ifade, fosforlu alanlardaki fosfatları kaldırır ve homojen CLK1 elde etmek için boyutsal hariç tutma kromatografisi (SEC) ve aniyon değiştirme kromatografisi kullanılır. Heterojen fosforlamanın olmaması sağlanır.

Antijen Kullanımı İçin Proteinler: Son derece immünojen proteinlerle kontaminasyonu önlemek için saflik değerlendirmesi gereklidir. Yapısal epitop antikorları için, antijenin üç boyutlu yapısal konformasyonu korunmalıdır.

Ağlaşım-Erken Proteinler: Farklı strainlerden ekranlama ve yetiştirme sıcaklıklarını düşürme gibi stratejiler, ağlaşım sorunlarını sınırlamak için uygulanır ve hızlı purifikasyon stratejileri tasarlanır.

Endotoksin Kaldırma: Pozitif yükleme kromatografisi ve polianyon ligand afinite kromatografisi gibi yöntemler endotoksinleri kaldırır ve LPS seviyelerinin uygulama sınırları altında olduğundan emin olunur.

Protein Kompleksleri: Alt birimler ayrı olarak ifade edilir ve işlevsel kompleksler oluşturmak için in vitro birleştirilir veya ortak ifade edilir. Kompleks bütünlüğü, homojenlik ve moler kütle açısından değerlendirilir.

Sonuç

Protein üretimi, biyokimyasal özellikler ve uygulamalar göz önüne alınarak stratejik tasarım ile başlar. İfade, temizleme ve Kalite Kontrolü (QC) sırasında koşullar ve yöntemler, kararlılık, toplanmama eğilimi ve yerel durum için optimize edilir. Temizlenmiş proteinler, biyofiziksel karakterizasyon gibi çeşitli sonraki süreçler için kullanılır.

Yaohai Bio-Pharma aynı zamanda kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arayışındadır ve endüstryede en rekabetçi ödülleri sunmaktadır. Herhangi bir sorunuz varsa, lütfen bizimle iletişime geçmeyi çekinmeyin: BD@yaohaibio.cn