Rekombinant İnsan İnsülininin Saflaştırma Sürecinin Optimize Edilmesi

Son yıllarda diyabet hastası büyümesi insülin talebini artırdı, ancak uygun fiyatlı insülin arzı yetersiz. Verimli, ekonomik insülin üretimi hayati önem taşıyor. Hızlı büyümesi ve düşük maliyeti nedeniyle çoğunlukla Escherichia coli (E. coli) ve maya yoluyla üretilen E. coli, karmaşık bir alt akış işleme süreciyle karşı karşıyadır.

Aşağı Akış İşlemeye Genel Bakış:

E. coli inklüzyon cisimciklerinden rekombinant insan insülininin saflaştırılması, geri kazanım, yıkama, çözündürme ve oksidasyon, ayırma, tampon değişimi, kromatografik saflaştırma, çöktürme, renatürasyon, enzimatik ayırma ve formülasyon dahil olmak üzere birden fazla adımı içerir.

Yaohai Bio-Pharma, uzmanlardan oluşan bir ekiple birlikte rekombinant insülin üretimi ve saflaştırma konusunda kapsamlı deneyime sahiptir ve insülin üretiminizin yüksek verimlilikle tamamlanmasını sağlar. Yüzlerce projeden edindiğimiz deneyimden yararlanarak Yaohai, Rekombinant İnsan İnsülini için Aşağı Akış Saflaştırma Sürecinin nasıl optimize edileceğini nazikçe özetlemektedir.

Dahil Etme Vücut İyileştirme ve Yıkama:

Hücreler mekanik yöntemler (ultrasonikasyon, yüksek basınçlı homojenizasyon gibi) veya lizozim işlemi kullanılarak parçalanır ve ardından safsızlıkları gidermek için yıkama tamponları (üre, Triton X-100 vb. içeren) kullanılır. Yıkama sırasında, maliyetleri kontrol ederken protein kalitesini sağlamak için parametrelerin optimize edilmesi gerekir.

İnklüzyon Cisimlerinin Çözünmesi ve Oksidasyonu:

Yüksek konsantrasyonlu denatüranlar (guanidin hidroklorür ve üre gibi) inklüzyon cisimlerini çözmek için kullanılır ve yanlış disülfür bağlarının oluşumunu önlemek için ditiyotreitol veya β-merkaptoetanol eklenir. pH ve sıcaklık, çözündürme ve oksidasyon reaksiyonlarını önemli ölçüde etkiler.

Bölünme ve Tampon Değişimi:

Siyanojen bromür ayrımı, N-terminal başlatıcı amino asidini çıkarmak için kullanılır, ancak toksisite ve düşük özgüllük sorunları yaratır. Diyaliz, ultrafiltrasyon veya boyut dışlama kromatografisi yoluyla, Tampon değişimi, sonraki işlemlere hazırlık olarak zararlı reaktifleri uzaklaştırır.

Kromatografik Saflaştırma ve Çöktürme:

İnsülini saflaştırmak için afinite kromatografisi, iyon değişim kromatografisi, ters faz kromatografisi, hidrofobik etkileşim kromatografisi ve boyut dışlama kromatografisi dahil olmak üzere birden fazla kromatografik teknik kullanılır. pH çökeltmesi ve çinko kristalleştirmesi gibi çökeltme yöntemleri, safsızlıkları gidermek ve proteinleri yoğunlaştırmak için kullanılır.

Renatürasyon:

Çözünmüş protein, disülfür bağlarının ve protein katlanmasının doğru oluşumunu desteklemek için bir renatürasyon tamponunda seyreltilir. Protein katlama sıvı kromatografisi ve diyaliz de renatürasyon için kullanılan yöntemlerdir.

Enzimatik Parçalanma ve Formülasyon:

Tripsin ve karboksipeptidaz B, C-peptidi parçalamak için kullanılır ve aktif insülin heterodimerini oluşturur. Son olarak, kristalizasyon ve liyofilizasyon, kalan tuzları ve tamponları gidermek için kullanılır ve stabil bir formülasyon hazırlanır. Farklı klinik ihtiyaçları karşılamak için spesifik katkı maddeleri (çinko ve protamin gibi) eklenir.

Sonuç:

İnsülinin aşağı akışta işlenmesi E. coli karmaşıktır. Gelecekteki odak, talebi karşılamak ve maliyetleri azaltmak için bu adımları verimli ve ekonomik üretim için optimize etmek olmalıdır.

Yaohai Bio-Pharma ayrıca aktif olarak kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arıyor ve sektördeki en rekabetçi tazminatı sunuyor. Herhangi bir sorunuz varsa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin: [email protected]