Yeniden Birleşimli İnsan İnsülini İçin Temizleme Süreçlerini Optimizasyon

Son yıllarda, diyabet hastalığı büyümesi insülin talebini artırmış olsa da, uygun fiyatlı insülin yetersiz miktarda üretiliyor. Etkin ve ekonomik insülin üretimi kritik öneme sahiptir. Hızlı büyüme ve düşük maliyet nedeniyle çoğunlukla Escherichia coli (E. coli) ve maya ile üretilen insülin, E. coli için karmaşık sonraki işleme adımlarıyla karşı karşıya kalır.

İleri İşleme Genel Bakış:

E. coli inklüzyon cisimlerinden rekombinant insan insülinini temizleme, birden fazla adımı içerebilir: toplama, yıkama, çözünürleştirme ve oksidasyon, kesme, tampon değişim, kromatografik temizleme, birleşim, yeniden doğallık kazandırma, enzimatik kesme ve formülasyon.

Yaohai Bio-Pharma, rekombinant insülin üretiminde ve temizlemede uzun yılların deneyimine sahip olup, uzman bir ekip ile çalışarak insülin üretiminizin yüksek verimle tamamlanmasını sağlar. Yüzlerce proje tecrübesi ışığında, Yaohai重组 insülinin ileri temizleme süreçlerini nasıl optimize edeceğinizi özetleyerek paylaşıyor.

Dahil Edici Cisim Kurtarma ve Yıkama:

Hücreler, mekanik yöntemler (örneğin ultrasonikasyon, yüksek basınçlı homojenizasyon) veya lizozim tedavisi ile bozulur ve ardından kirlilikleri kaldırmak için yıkama tamponları (ürea, Triton X-100 içerir vb.) kullanılır. Yıkamada, maliyetleri kontrol ederken protein kalitesini güvence altına almak için parametreler optimize edilmelidir.

Dahil Edici Cisim Çözünürleştirme ve Oksidasyonu:

Yüksek konsantrasyondaki denaturantlar (mesela guanidin hidroklorür ve ürea) dahil edici cisimleri çözünürleştirmek için kullanılır ve yanlış disülfid bağı oluşumunu önlemek için dithiothreitol veya β-merkaptouanol eklenir. pH ve sıcaklık, çözünürleştirme ve oksidasyon tepkimelerine önemli ölçüde etki eder.

Kesme ve Tampon Değişimi:

Sianür bromür bölünmesi, N-terminallerdeki başlangıç amino asidini kaldırmak için kullanılır, ancak zehirlilik ve düşük spesifite sorunları taşır. Tampon değişimi, diyaliz, ultrafiltreleme veya boyutsal ayrışım kromatografisi ile zararlı ajanlar kaldırılarak sonraki işlemler için hazırlanır.

Kromatografik Temizleme ve Bırakma:

İnsülinin temizlenmesi için several kromatografik teknikler kullanılır: bağımlılık kromatografisi, iyon değiştirme kromatografisi, ters faz kromatografisi, hidrofob etkileşim kromatografisi ve boyutsal ayrışım kromatografisi. pH bırakımı ve çinko kristalleştirme gibi bırakım yöntemleri, bozulmaları kaldırmak ve proteinleri konsantre etmek için kullanılır.

Yeniden Katılaşdırma:

Çözünmüş protein, disülfid bağlarının doğru oluşmasını ve protein katmanlarının oluşmasını teşvik etmek için yeniden katılaşma tamponunda seyreltilir. Protein-katmanı sıvı kromatografi ve diyaliz de, yeniden katılaşmayı sağlamak için kullanılan yöntemlerdir.

Enzimatik Bölünme ve Formülasyon:

Trypsin ve carboxypeptidase B, C-peptidini kesmek ve aktif insülin heterodimerini oluşturmak için kullanılır. Nihayetinde, kalan tuzları ve tamponları kaldırmak amacıyla kristalleştirme ve liofilizasyon uygulanır ve böylece kararlı bir formulasyon hazırlanır. Farklı klinik gerekliliklere uygun olabilmek için özel eklemeler (örneğin çinko ve protamin) yapılır.

Çözüm:

Insülinin aşağı akım işleme süreci E. coli karmaşıktır. Gelecek odak noktası, talebi karşılamak ve maliyetleri düşürmek için bu adımları optimize etmelidir.

Yaohai Bio-Pharma aynı zamanda kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arayışındadır ve endüstryede en rekabetçi ödülleri sunmaktadır. Herhangi bir sorunuz varsa, lütfen bizimle iletişime geçmeyi çekinmeyin: [email protected]