Biofarmase üretiminde E. coli hücre bütünlüğünü optimizasyon

Biyofarmasek alanında, Escherichia coli (E. coli) rekombinant proteinlerin ifadesi için bir ev sahibi olarak önemli bir rol oynar. E. coli'nin hücre bütünlüğü, protein verimi, kalitesi ve üretim maliyetleri açısından kritik öneme sahiptir. Bu bütünlük, esasen iç zar (IM) ve dış zar (OM) yapısı ve işlevleriyle ilgilidir.

Yaohai Bio-Pharma, E. coli fermantasyonu ve rekombinant protein ifadesinde 15 yıllık deneyime sahiptir. Yüksek E. coli hücre bütünlüğünü korumak için çeşitli stratejiler kullanırız ve 30 saatlik bir yetiştirme döngüsünde plazmid verimi 1g/L'i aşar. Mikrobiyal ifade konusundaki geniş deneyimlerini temel alarak, Yaohai Bio-Pharma biyofarmasek üretim sırasında E. coli'nin hücre bütünlüğünü izlemek ve geliştirmek için birkaç etkili strateji özetlemiştir.

E. coli Hücre Bütünlüğünü İzleme Teknikleri

Akış Sitometrisi: Hücre durumlarını, örneğin propidyum yodür ile hücre viability'sini ve SYTO9 ile OM permeabilitesini değerlendirmek için fluoresan boyalar kullanır. Ancak, pahalı boyaların ve karmaşık işlemlerin gerekli olduğu bir yöntemdir.

Kolorimetrik Yöntemler: Süpernatant'taki DNA içeriği, enzim aktiviteleri vb. tespit ederek hücre lizisini yansıtır, örneğin PicoGreen reagent seti ve alkal fosfataz aktivite analizleri kullanılabilir. Ancak bu yöntemler zahmetli olup pahalı reaktifler gerektirir.

Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi: OM sızıntısını değerlendirmek için ekstraselüler ürün konsantrasyonlarının çevrimdışı tespiti için kullanılır. Ancak, otomasyonu karmaşık ve analiz süresi uzundur.

Vibrasyonel Spektroskopi Teknikleri: Yakın-ve orta-infraröj spektroskopisi gibi, potansiyel uygulamaları olan ancak spektral müdahale ve veri analizi zorluklarını aşması gereken teknikler.

Dielektrik Spektroskopi: Hücre süspansiyonlarının impeydansını ölçerek membran bütünlüğünü değerlendirir ve gerçek zamanlı çevrimiçi izlemeyi sağlar. Ancak, girişimlere karşı duyarlıdır ve kalibrasyon zordur.

Biyosensörler: Hücrelerin veya periplazmadan sızan bileşenleri tespit edebilir, ancak sensör yeniden üretilme gibi sorunlarla karşı karşıya kalır.

Viskozite ve Yoğunluk Ölçümleri: Analizinde hızlı ve maliyetindedir, ancak seçicilikten yoksunlardır ve karar vermek için çoklu parti verilerinin dikkate alınması gerekir.

Hücre Bütünlüğüne Etki Eden Faktörler

Strain Mühendisliği: Lipoprotein genlerini mutasyona uğratma gibi genetik mühendislik yoluyla OM bütünlüğünü değiştirir, ancak strain büyümesini etkileyebilir.

İndirgenmiş Stres: Yeniden kombinasyonlu proteinlerin aşırı ifadesi metabolik bir yük oluşturur ve hücre fiziolojisini etkiler. Bu nedenle, ifade seviyelerinin makul bir şekilde düzenlenmesi gerekir.

Substrate Besleme Oranı: Çok yüksek veya düşük besleme oranları hem hücre lizisini hem de OM bütünlüğünü etkiler.

Sıcaklık ve Havalandırma: Yüksek sıcaklıklar ve düşük oksijen kullanılabilirliği ifade stresini artırır ve OM sızıntısını arttırır, ancak belirli etkiler değişiktir.

Osmotikler: Periplazmik proteinleri salıvermek için kullanılır, ancak hücre viyabilitesini hasar eder, bu da uygulamalarını sınırlar.

Sonuç: Gelecek araştırmalar, hücre zar bütünlüğünü kesin olarak kontrol etmek için membran tamiri mekanizmalarına ve koşullarına daha derinlemesine girmelidir. İzleme yöntemlerini optimize etmek ve etkileyen faktörleri analiz etmek, ürün kalitesini artıracak ve biyofarmaseyt endüstrisinin gelişmesini sağlayacaktır.

Ayrıca küresel düzeyde kurumsal veya bireysel ortaklar arıyoruz. Endüstride en rekabetçi ödeneği sunuyoruz. Herhangi bir sorunuz varsa, lütfen bizimle iletişime geçmeyi çekinmeyin [email protected]