Výrobný proces eGFP mRNA

Výroba mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) zahŕňa rad techník molekulárnej biológie na vytvorenie funkčnej RNA molekuly, ktorá kóduje pre expresiu eGFP. V oblasti mRNA eGFP spoločnosť Yaohai Bio-Pharma nashromáždza bohaté skúsenosti s riešením špecifických požiadaviek klientov. S využitím našich skúseností sme zoskupili procesový tok pre výrobu mRNA EGFP.

1. Klonovanie genu eGFP : Je potrebné získať genecký postup kódujúci pre eGFP. Tento gen je typicky klonovaný z predexistujúceho plazmidového vektora alebo syntetizovaný umeľne na báze známeho nukleotidového postupu. Klonovaný gen sa následne overí sekvenovаниm pre zabezpečenie presnosti.
2. Optimalizácia genu pre expresiu : Pre optimálny výraz v cieľovom systéme (napr. mäkkotvarové bunky, baktérie alebo in vitro transkripčné systémy) môže byť gen eGFP upravený kódonovou optimalizáciou. Toto zahŕňa nahradenie rearých kódov v pôvodnom postupe častejšie používanými v príslušnom hostiteli, čo zvyšuje pravdepodobnosť efektívneho prekladu.
3. In vitro Príprava transkripčného šablóny : Keď je optimalizovaný gen pripravený, zaradený je do vhodného vektora, často plazmidu, ktorý obsahuje regulačné elementy potrebné pre transkripciu (napr. sékvenčnú ústupňu). Tento plazmid slúži ako šablóna pre in vitro transkripciu.
4. In vitro Transkripcia : Pomocou pripraveného plazmidového šablónu sa vykonáva in vitro transkripcia na syntézu eGFP mRNA. Tento proces zahŕňa použitie enzymov RNA polymerázy, ktoré poznajú promotorový postup a iniciovateľnú transkripciu, produkujúc komplementárny RNA vlákienku ku DNA šablóne. Podľa požadovaného aplikovania môže byť mRNA zakončená, polyadenylovaná a/alebo modifikovaná na zvyšovanie stability a účinnosti prekladu.
5. Čistenie a kvalitná kontrola : Synthesovaná eGFP mRNA je následne očištěná od kontaminantov vrátane DNA, proteínov a voľných nukleotidov. Metódy čistenia môžu zahŕňať gelovú elektroforezu, stĺpcovú chromatografiu alebo separáciu na báze žeraniek. Po čistení sa mRNA analyzuje podľa kvality, vrátane koncentrácie, čistoty a integrity pomocou techník ako sú UV-Vis spektrofotometria a gelová elektroforeza.
6. Uloženie a dodanie : Očistená mRNA eGFP je typicky uchovávaná pri nízkych teplotách pre zachovanie stability. Pre experimentálne účely môže byť mRNA doručená do buniek rôznymi spôsobmi, vrátane elektroporácie, lipofekcie alebo virálnych vektorov, podľa konkrétneho aplikovania a typu cieľovej bunky.
7. Výraz a overenie : Počas vstupu do bunky sa mRNA eGFP preloží na zvýšený zelený fluorescenčný protein, ktorý môžeme pozorovať pomocou fluorescenčnej mikroskopie. To umožňuje overiť úspešnú produkciu, doručenie a výraz mRNA.

Stručne povedané, produkcia mRNA eGFP zahŕňa klonovanie genu, jeho optimalizáciu pre výraz, prípravu šablóny pre in vitro transkripciu, vykonanie transkripčnej reakcie, očistenie výslednej mRNA a nakoniec jej doručenie do buniek pre výraz a overenie.

Hľadáme tiež aktívne globálnych partnerov, či už institucionálnych alebo jednotlivcov. Ponúkame najkonkurenceschopnejšie odškodnenie v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhejte nás kontaktovať: [email protected]