Výrobný proces eGFP mRNA

Výroba mRNA eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) zahŕňa sériu techník molekulárnej biológie na vytvorenie funkčnej molekuly RNA, ktorá kóduje expresiu eGFP. V oblasti eGFP mRNA spoločnosť Yaohai Bio-Pharma nazbierala rozsiahle skúsenosti v oblasti uspokojovania špecifických potrieb klientov. Využitím našich skúseností sme syntetizovali procesný tok na výrobu EGFP mRNA.

1. Klonovanie génu eGFP: Získa sa génová sekvencia kódujúca eGFP. Tento gén sa typicky klonuje z už existujúceho plazmidového vektora alebo sa syntetizuje umelo na základe známej nukleotidovej sekvencie. Klonovaný gén sa potom overí sekvenovaním, aby sa zabezpečila presnosť.
2. Génová optimalizácia pre expresiu: Pre optimálnu expresiu v cieľovom systéme (napr. cicavčích bunkách, baktériách alebo in vitro transkripčných systémoch) môže gén eGFP podstúpiť optimalizáciu kodónov. To zahŕňa nahradenie zriedkavých kodónov v pôvodnej sekvencii častejšie používanými kodónmi v hostiteľskom organizme, čím sa zvyšujú šance na účinnú transláciu.
3. In vitro Príprava transkripčnej šablóny: Akonáhle je optimalizovaný gén pripravený, je začlenený do vhodného vektora, často plazmidu, ktorý obsahuje regulačné elementy potrebné na transkripciu (napr. promótorovú sekvenciu). Tento plazmid slúži ako templát pre in vitro transkripciu.
4. In vitro Prepis: Pomocou pripraveného plazmidového templátu sa uskutoční in vitro transkripcia, aby sa syntetizovala eGFP mRNA. Tento proces zahŕňa použitie enzýmov RNA polymerázy, ktoré rozpoznávajú promótorovú sekvenciu a iniciujú transkripciu, čím vytvárajú komplementárne vlákno RNA k templátu DNA. V závislosti od požadovanej aplikácie môže byť mRNA uzavretá, polyadenylovaná a/alebo modifikovaná, aby sa zvýšila stabilita a účinnosť translácie.
5. Čistenie a kontrola kvality: Syntetizovaná eGFP mRNA sa potom purifikuje, aby sa odstránili všetky kontaminanty, vrátane DNA, proteínov a voľných nukleotidov. Metódy čistenia môžu zahŕňať gélovú elektroforézu, stĺpcovú chromatografiu alebo separáciu na báze guľôčok. Po purifikácii sa mRNA analyzuje na kvalitu, vrátane koncentrácie, čistoty a integrity, pomocou techník, ako je UV-Vis spektrofotometria a gélová elektroforéza.
6. Skladovanie a doručenie: Purifikovaná eGFP mRNA sa typicky skladuje pri nízkych teplotách, aby sa udržala stabilita. Na experimentálne použitie môže byť mRNA dodaná do buniek pomocou rôznych metód, vrátane elektroporácie, lipofekcie alebo vírusových vektorov, v závislosti od špecifickej aplikácie a typu cieľovej bunky.
7. Vyjadrenie a overenie: Keď sa eGFP mRNA dostane do bunky, preloží sa do zosilneného zeleného fluorescenčného proteínu, ktorý je možné vizualizovať pomocou fluorescenčnej mikroskopie. To umožňuje overenie úspešnej produkcie, dodávky a expresie mRNA.

Stručne povedané, produkcia eGFP mRNA zahŕňa klonovanie génu, jeho optimalizáciu na expresiu, prípravu in vitro transkripčného templátu, uskutočnenie transkripčnej reakcie, purifikáciu výslednej mRNA a nakoniec jej dodanie do buniek na expresiu a overenie.

Aktívne tiež hľadáme inštitucionálnych alebo individuálnych globálnych partnerov. Ponúkame najkonkurencieschopnejšiu kompenzáciu v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]