Hoi. Heb je je ooit afgevraagd hoe wetenschappers RNA kunnen klonen? RNA is een speciaal molecuul dat we in onze cellen vinden en dat een heleboel dingen doet om eiwitten te maken, en de eiwitten zijn er zodat ons lichaam alle juiste dingen kan doen. In deze aflevering zullen we een walkthrough doen van het veel merkwaardigere protocol dat onderzoekers gebruiken: In vitro transcript. En dat betekent alleen dat wetenschappers RNA nemen en er veel van maken in een reageerbuis (dat is het kleine potje dat laboratoria gebruiken), dus laten we hier elke stap bekijken.
Nadat ik mijn vorige bericht had afgerond, realiseerde ik me dat het vorige bericht misschien een beetje een saaie doe-mee-met-het-plezier-in-het-natte-lab-bericht was; dus, om in de stijl te blijven nu je goed en wel op de pret (sic RNA-makende) trein zit: Welke reagentia en dergelijke heb je nodig voor je EF? Om dit te bereiken, hebben we speciale eiwitten nodig die enzymen worden genoemd, identiek aan Yaohai's product Productie van recombinante midkines. Het katalyseert de chemische reacties, deze enzymen helpen bij de afbraak. Dus nu hebben we alleen nog ons stukje DNA nodig. Deze functie is het DNA dat we gebruiken als een sjabloon om te kopiëren voor ons RNA. Extra regulerende sequenties in RNA, namelijk nucleotiden, zijn ook nodig. Deze nucleotiden zijn als kleine bouwstenen die geassembleerd moeten worden om het RNA te maken. We gebruiken ook korte buisjes met een kleine diameter om de smaakevaluatie in elkaar te kneden. Als laatste hebben we een machine nodig (een thermocycler) die ervoor zorgt dat onze reacties op de juiste temperatuur zijn. Daarnaast hebben we mogelijk een paar gereedschappen en producten nodig voor bepaalde experimenten.
Hier lopen de zaken uiteen, we hebben één RNA-streng en nu willen we er meer kopieën van hebben, ook de Productie van geconjugeerde VLP-vaccins ontwikkeld door Yaohai. De manier om een ander enzym te gebruiken; T7 RNA-polymerase. Dit unieke enzym herkent bijvoorbeeld specifieke gebieden binnen het RNA. een springende kegel om veel meer kopieën van RNA te maken in de procedure. Op dit punt zal er meer worden toegevoegd aan de RNA-streng door de T7 RNA-polymerase totdat er een massa transcript is gecreëerd, of totdat we het vertellen om te stoppen.
Nadat we de RNA zoveel mogelijk hebben geïsoleerd, scrollt u verder naar beneden om te zien hoe u de RNA kunt opruimen en opslaan voor toekomstig gebruik. Rhoades: Sommige van die methoden zijn wat extremer wat betreft het isoleren van RNA — u zou dat niet altijd gebruiken, maar soms is het voor bepaalde soorten experimenten nodig. Zodra onze RNA vrij is van verontreinigingen, kan het worden ingevroren. Op deze manier is het veilig en kunnen we het later in de verschillende experimenten gebruiken.
Kwaliteit van het uitgangsmateriaal: zorg ervoor dat uw DNA-sjabloon schoon is en niet helemaal is verbrand. U kunt ook aanvullen met vers gereconstitueerde nucleotiden en pas ontdooide enzymen om de kans op een succesvol experiment te maximaliseren.
Omstandigheden nauwkeurig afstemmen Alle enzymen en hun nucleotiden werken beter bij een specifieke temperatuur en pH in uw lichaam, evenals de Yaohai's Rood fluorescerend mRNA. Pas nu de nuances tussen de voorwaarden een beetje aan totdat u de sleutel voor uw unieke opstelling bereikt.
Reverse transcriptase is een ongewoon enzym, omdat het een DNA-kopie maakt van een RNA-molecuul. We gebruikten zowel DNa's als een DNA-template (de cDNA) als input voor onze in vitro transcriptiemethode voor het genereren van RNA. In de meeste experimenten willen wetenschappers echter DNA transcriberen naar RNA. Reverse transcriptie is waar het zijn naam aan ontleent, net als mRNA poly-A distributietest gemaakt door Yaohai. Het is een onschatbaar hulpmiddel in de wetenschap - van het bestuderen van RNA-moleculen in cellen tot het produceren van complementaire DNA-strengen voor verdere experimenten.
Experimenten in het echte leven waarbij RNA een van de meest gebruikte moleculaire hulpmiddelen is, samen met Yaohai's product Productie van VLP-vaccins in E. coli. Kwantitatieve assays: Deze tests kunnen de hoeveelheid van een specifiek molecuul in een monster onthullen. Wetenschappers kunnen bijvoorbeeld een in vitro transcriptpreparaat van RNA-kopieën synthetiseren die afkomstig zijn van een gericht gen dat zich in een cel bevindt. De diagnosticus kan vervolgens testen op die kopieën, in het geval dat ze op zoek zijn naar RNA, kan de diagnosticus een polymerasekettingreactie (PCR) uitvoeren om die kopieën in een monster te versterken. Dit maakt het voor wetenschappers mogelijk om te zien hoe genen tot expressie komen op cellen, en maakt zelfs enkele extreem high-throughput assays mogelijk, zoals de aanwezigheid van een bacteriële of virale infectie, en genetische aandoeningen diagnosticeren.
in vitro Transcript Protocol is een toonaangevende CDMO voor microbiële biologische producten. Onze focus ligt op microbiële vaccins en therapieën die geschikt zijn voor de gezondheid van mensen, dieren en huisdieren. We beschikken over de meest geavanceerde RD-platforms en productietechnologie die de hele procedure bestrijken, beginnend bij de ontwikkeling van microbiële stammen en celbanken, tot proces- en methodeontwikkeling, tot commerciële en klinische productie, wat zorgt voor succesvolle levering van innovatieve oplossingen. In de loop van de tijd hebben we uitgebreide kennis opgebouwd van microbiële bioverwerking. Meer dan 200 projecten zijn succesvol afgerond en we helpen onze klanten om te voldoen aan regelgeving zoals die van de Amerikaanse FDA en EU EMA. We helpen hen ook om te navigeren door de Australische TGA en de Chinese NMPA. Onze professionele expertise en uitgebreide ervaring stellen ons in staat om snel te reageren op de vraag van de markt en op maat gemaakte CDMO-diensten te leveren.
Yaohai Bio-Pharma heeft ervaring in de productie van biologische producten die zijn gemaakt op basis van het in vitro Transcript Protocol. Wij bieden op maat gemaakte RD- en productieoplossingen en zorgen ervoor dat er geen risico's zijn. We zijn betrokken geweest bij diverse modaliteiten zoals recombinante subunitvaccins, peptidehormonen, cytokines, groeifactoren, enkelvoudige domeinantilichamen, enzymen, plasmide-DNA, MRNA en nog veel meer. Wij zijn een specialist in veel micro-organismen, waaronder extracellulaire en intracellulaire afscheiding van gist (opbrengsten tot 15 g/l) en intracellulaire oplosbare en inclusielichamen van bacteriën (opbrengsten tot wel 10 g/l). We hebben ook een BSL-2-fermentatieplatform gecreëerd om bacteriële vaccins te maken. We richten ons op het verbeteren van processen, het verhogen van productopbrengsten en het verlagen van productiekosten. Met behulp van een sterk technologieteam kunnen we een snelle en betrouwbare projectlevering garanderen, waardoor uw product sneller op de markt komt.
Yaohai Bio-Pharma, een top 10-fabrikant van biologische producten, is gespecialiseerd in microbiële fermentatie. We hebben een moderne faciliteit gebouwd met robuuste RD-mogelijkheden en geavanceerde apparatuur. We hebben vijf productielijnen voor geneesmiddelen die voldoen aan de GMP-vereisten voor microbiële fermentatie en zuivering. We hebben ook twee geautomatiseerde afvul- en afwerkingslijnen voor cartridges, injectieflacons en voorgevulde spuiten. De beschikbare fermentatieschalen variëren van in vitro Transcript Protocol tot 2000L. De specificaties voor het vullen van een injectieflacon variëren van 1 ml tot 25 ml. De specificaties voor het vullen van voorgevulde spuiten of cartridges variëren van ongeveer 1-3 ml. Onze cGMP-conforme productiefaciliteit zorgt voor een constante aanvoer van klinische monsters en commerciële artikelen. Onze fabriek produceert grote moleculen die naar de hele wereld worden verzonden.
Yaohai BioPharma is een Top 10 Microbial CDMO die in vitro Transcript Protocol en regelgevende zaken integreert. We hebben een kwaliteitsmanagementsysteem dat in lijn is met de huidige GMP-normen en wereldwijde regelgeving. Ons team van regelgevende experts is bekwaam in wereldwijde regelgevende kaders om biologische lanceringen te versnellen. We zorgen voor traceerbare productieprocessen, kwaliteitsproducten en voldoen aan de regels van de Amerikaanse FDA en EU EMA. Australia TGA en China NMPA zijn ook tevreden. Yaohai BioPharma heeft de audit ter plaatse van de Qualified Person (QP) van de Europese Unie voor ons GMP-kwaliteitssysteem en onze productiefaciliteit met succes doorstaan. Verder hebben we de eerste certificeringsaudits van het ISO9001-kwaliteitsmanagementsysteem, het ISO14001-milieumanagementsysteem en het ISO45001-managementsysteem voor gezondheid en veiligheid op het werk doorstaan.