Hallo daar. Heb je ooit gewonderd hoe wetenschappers RNA kunnen klonen? RNA is een speciale molecuul dat we in onze cellen aantreffen en die allerlei dingen doet om eiwitten te maken, en de eiwitten zijn er voor zorgen dat ons lichaam alles goed doet. In dit deel zullen we een rondleiding geven door het veel interessantere protocol dat onderzoekers gebruiken: In vitro transcriptie. En dat betekent gewoon dat wetenschappers RNA nemen en er veel van maken in een proefbuis (dat is dat kleine potje dat laboratoria gebruiken) dus laten we elk stapje bekijken.
Na afloop van mijn vorige bericht realiseerde ik me dat dat laatste misschien wat droog was - kom dan maar meedoen met de plezierige werkbankpost; dus, om de vorm in stand te houden nu je echt goed en truly op de trein van plezier (sic RNA-maken) zit: Welke reagentia en zal je nodig hebben voor je EF?? Om dit te bereiken, hebben we speciale eiwitten nodig die enzymen heten, identiek aan Yaohai's product Recombinant Midkine Productie . Het katiseert de chemische reacties, deze enzymen helpen bij de afbraak. Dus nu hebben we alleen nog een stukje DNA nodig. Deze functie is het DNA dat we gebruiken als sjabloon om onze RNA mee te kopiëren. Extra regulatorische sequenties in RNA, namelijk nucleotiden, zijn ook vereist. Deze nucleotiden zijn zoals kleine bouwstenen die samengevoegd moeten worden om RNA te vormen. We gebruiken ook korte buisjes van kleine diameter om de smaakbeoordeling door te voeren. Ten slotte hebben we een apparaat (een thermocycler) nodig dat ervoor zorgt dat onze reacties de juiste temperatuur hebben. Aanvullend kunnen we mogelijk enkele gereedschappen en producten nodig hebben voor bepaalde experimenten.
Hier gaan de dingen verschillen; we hebben één RNA-strand en nu willen we meer kopieën ervan maken, ook de Conjugeerde VLP Vaccins Productie ontwikkeld door Yaohai. De manier om dit te bereiken is het gebruik van een andere enzym; T7 RNA polymerase. Deze unieke enzym herkent bijvoorbeeld specifieke gebieden binnen de RNA. Een springend punt voor het maken van veel meer kopieën van RNA in het vervolg. Op dit punt zal er meer worden toegevoegd aan de RNA-strand door de T7 RNA polymerase tot een grote hoeveelheid transcript is gemaakt, of tot dat we het zeggen te stoppen.
Nadat we het RNA zo veel mogelijk hebben geïsoleerd, scroll dan verder omlaag om te zien hoe je het RNA kunt schoonmaken en opslaan voor toekomstig gebruik. Rhoades: Sommige van die methoden zijn wat extremer in termen van RNA-isolatie — je zou ze niet altijd gebruiken, maar soms voor bepaalde soorten experimenten is het nodig. Zodra ons RNA vrij is van alle verontreinigingen, kan het ingevroren worden opgeslagen. Op deze manier is het veilig en kunnen we het later gebruiken in verschillende experimenten.
Kwaliteit van het startmateriaal: zorg ervoor dat je DNA-sjabloon schoon is en niet al te erg beschadigd. Je kunt ook vers gereconstrueerde nucleotiden en pas ontdooide enzymen toevoegen om de kans op een succesvol experiment te maximaliseren.
Fijnafstemming van de voorwaarden: Alle enzymen en hun nucleotiden werken beter bij een specifieke temperatuur en pH binnen je lichaam, evenals bij die van de Yaohai. Rode Fluorescerende mRNA . Pas nu de nuances tussen de voorwaarden iets aan tot je bij de sleutel komt voor je unieke setup.
Reverse transcriptase is een bijzondere enzym, omdat het een DNA-kopie maakt van een RNA-molecuul. We gebruikten zowel DNAs als een DNA-sjabloon (het cDNA) als invoer voor onze in vitro transcriptiemethode voor het genereren van RNA. In de meeste experimenten zouden wetenschappers echter willen dat DNA wordt omgezet in RNA. Reverse transcriptie haalt zijn naam hieruit op dezelfde manier. mRNA poly-A distributietest gemaakt door Yaohai. Het is een onmisbaar hulpmiddel in de wetenschap - Van het bestuderen van RNA-moleculen binnen cellen tot het produceren van complementaire DNA-stranden voor verdere experimenten.
Echte experimenten waarbij RNA een van de meest gebruikte moleculaire gereedschappen is, samen met Yaohai's product VLP Vaccinproductie in E. coli . Kwantitatieve assays: Deze testen kunnen de hoeveelheid van een specifieke molecuul in een monster onthullen. Bijvoorbeeld, wetenschappers kunnen een in vitro transcriptopbreiding synthetiseren van RNA-kopieën afgeleid van een doelwitgen dat zich binnen een cel bevindt. Het diagnostisch onderzoek kan dan assays uitvoeren voor die kopieën; in het geval waarbij ze op zoek zijn naar RNA, kan het diagnostisch onderzoek een polymerase chain reaction (PCR) uitvoeren om die kopieën in een monster te vermenigvuldigen. Dit maakt het mogelijk voor wetenschappers om te zien hoe genen worden uitgedrukt in cellen, en zelfs toestaat voor sommige extreem hoge-throughput assays, zoals het aanwezig zijn van een bacteriële of virale infectie, en genetische aandoeningen te diagnosticeren.
in vitro Transcript Protocol is een marktleider in microbial biologische CDMO. Onze focus ligt op microbiële geproduceerde vaccins en therapieën die geschikt zijn voor de gezondheidsbeheer van mensen, dieren en huisdieren. We beschikken over de meest geavanceerde RD-platforms en productietechnologieën die de volledige procedure bestrijken, vanaf de ontwikkeling van microbiële stammen en celbanken, tot proces- en methodontwikkeling, tot commerciële en klinische productie, wat garandeert dat innovatieve oplossingen succesvol worden afgeleverd. Tijdens onze ontwikkeling hebben we uitgebreide kennis vergaard over microbiële bioverwerking. Meer dan 200 projecten zijn succesvol afgerond en we helpen onze klanten om te voldoen aan regelgeving zoals die van de Amerikaanse FDA en de Europese EMA. We ondersteunen hen ook bij het navigeren door de eisen van de Australische TGA en de Chinese NMPA. Onze professionele expertise en uitgebreide ervaring laten ons snel reageren op marktvragen en aangepaste CDMO-diensten bieden.
Yaohai Bio-Pharma heeft ervaring in de productie van biologische middelen die zijn gemaakt via het in vitro Transcript Protocol. We bieden op maat gemaakte RD- en productieloplossingen terwijl we ervoor zorgen dat er geen risico's zijn. We hebben gewerkt aan diverse modaliteiten zoals subeenheid vaccins, recombinant, peptiden hormonen, cytokines, groeifactoren, single-domain antilichamen enzymen, plasmid DNA MRNA, en veel meer. We zijn gespecialiseerd in vele microorganismen, waaronder gist extracellulair en intracellulair secret (opbrengsten tot 15g/L) en bacteriën intracellulair oplosbaar en inclusie lichaam (opbrengsten tot 10g/L). We hebben ook een BSL-2 fermentatieplatform ontwikkeld om bacteriële vaccins te maken. We richten ons op procesverbetering, verhoging van productopbrengsten en vermindering van productiekosten. Met een sterk technisch team kunnen we snelle en betrouwbare projectleveringen garanderen, wat uw product sneller op de markt brengt.
Yaohai Bio-Pharma, een van de top 10 producenten van biologische producten, specialiseert zich in microbiele fermentatie. We hebben een modern complex gebouwd met sterke R&D mogelijkheden en geavanceerd apparatuur. We beschikken over vijf werkstoffenproductielijnen die voldoen aan GMP-eisen voor microbiele fermentatie en zuivering. We hebben ook twee geautomatiseerde vul- en afwikkelingslijnen voor patroons, flessen en voorgevulde spuiten. De beschikbare fermentatieschalen lopen uiteen van in vitro Transcript Protocol tot 2000L. De specificaties voor het vullen van een flesje lopen van 1ml tot 25ml. De specificaties voor het vullen van voorgevulde spuiten of patroons lopen van ongeveer 1-3ml. Ons cGMP-compatibel productiecomplex garandeert een constante levering van klinische monsters en commerciële producten. Onze fabriek produceert grote moleculen die wereldwijd worden verscheept.
Yaohai BioPharma is een Top 10 Microbiële CDMO die in vitro Transcript Protocol en regulieringszaken integreert. We beschikken over een kwaliteitsbeheersysteem dat in overeenstemming is met de huidige GMP-standaarden en wereldwijde voorschriften. Ons team van experts in regulieringszaken heeft uitstekende kennis van wereldwijde reguleringskaders om de lancering van biologische producten te versnellen. We garanderen volg- en controleerbare productieprocessen, kwaliteitsproducten en naleving van de voorschriften van de Amerikaanse FDA en de Europese EMA. De Australische TGA en de Chinese NMPA zijn ook tevreden. Yaohai BioPharma heeft succesvol de audit ter plaatse doorlopen van de Geautoriseerde Persoon (QP) van de Europese Unie voor ons GMP-kwaliteitsysteem en onze productiefaciliteit. Bovendien hebben we de eerste certificatieaudits gehaald van het ISO9001 Kwaliteitsbeheersysteem, het ISO14001 Milieubeheersysteem en het ISO45001 Systeem voor Arbeidshygiëne en -veiligheid.