penutupan pada hujung 5' adalah pengubahsuaian penting bagi mRNA. mRNA dengan struktur penutup, terutamanya struktur Cap1, membolehkan mRNA mengelakkan tanggapan imun bawaan dalam badan, menyebabkan translasi protein yang cekap.
Penutupan enzimatik (kaedah dua langkah) adalah kaedah konvensional penutupan mRNA, serupa dengan proses penutupan dalam organisma eukariotik. Di bawah tindakan siri enzim, 7-metilguanine (m7G) dipautkan kepada hujung 5' mRNA melalui ikatan trifosfat 5'-5' dan menjalani pemodifikasian metil untuk membentuk struktur penutup Cap 1 (m7GpppN).
Rajah pembentukan struktur penutup semula jadi
Aliran tindak balas penutupan enzimatik adalah seperti berikut:
Plasmid DNA yang telah dilinierkan digunakan sebagai templat untuk transkripsi in vitro (IVT) dalam kehadiran polimerase T7, dan mRNA dengan struktur penutup hujung 5' terbentuk selepas pemurnian satu langkah menggunakan enzim penutup vaccinia dan 2'-O-metiltransferase.
Butiran Perkhidmatan
Perkhidmatan Pilihan |
Butiran Perkhidmatan |
Tempoh Penghantaran (hari) |
penutupan Enzimatik mRNA |
Tindak balas penutupan enzimatik |
1 |
Optimasi tindak balas penutupan - pilihan |
Reka bentuk dan optimasi komponen tindak balas |
3~7 |
Ciri-ciri Kami
- Reka bentuk dan optimasi komponen tindak balas penutupan
Komponen tindak balas penutupan telah dioptimalkan, dan pengeluaran transkrip mRNA meningkat secara ketara.
- Pengesahan ungkapan in vitro
MRNA yang diberi penutupan ditransfek ke dalam sel 293T, dan ungkapan protein sasaran boleh dikesan.
- Kawalan ketat terhadap RNase
Melalui kawalan ketat RNase pada alam sekitar eksperimen dan bahan habisan, pemecahan mRNA dipencegah dengan berkesan.
Kajian Kes
Platform mRNA Yaohai Bio-Pharma telah membina proses tindak balas penutupan yang sempurna.
Untuk mRNA eGFP, sebuah praproduk mRNA yang disiapkan melalui penutupan enzimatik, isyarat kecerlangan eGFP (kecerlangan hijau) pada tahap tinggi boleh diperhatikan selepas mentransfek 293T sel selama 24 jam, yang dikesan oleh Western Blot (WB), menunjukkan bahawa protein sasaran, protein kecerlangan hijau diperkuat (eGFP), boleh diekspresikan dengan cekap dalam persekitaran in vitro.
Ekspresi mRNA eGFP Dicap Enzimatik dalam Sel 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
