Berbanding dengan penutupan enzimatik dua langkah, kaedah penutupan co-transkripsional satu langkah boleh mengurangkan secara signifikan aliran proses. Kaedah ini berorientasikan hasil dan melibatkan penambahan analog topi kepada tindak balas transkripsi in vitro (IVT). Analog topi boleh diperkenalkan pada permulaan transkripsi, dan mRNA dengan struktur topi boleh diperoleh selepas penyelesaian transkripsi. Analog topi generasi ketiga semasa ini boleh mengelakkan penutupan terbalik dan menambahkan langsung struktur Cap 1 kepada produk transkripsi.
Untuk pertimbangan imunogenisiti mRNA dalam badan dan kecekapan penterjemahan, proses IVT sering menggunakan beberapa jenis NTP yang dimodifikasi, dan nukleotida dimodifikasi biasa adalah pseudouridine (Ψ), N1-metil-pseudouridine (N1Ψ), dan 5-metilcytosine (5mC).
Rajah: Gambar rajah Tindak Balas Penutupan Co-transkripsional mRNA
Butiran Perkhidmatan
PERKHIDMATAN |
Butiran Perkhidmatan |
Tempoh Penghantaran (hari kerja) |
Penutupan co-transkripsional |
Tanggapan transkripsi in vitro (Clean Cap analog) |
1-2 |
| Pemodifikasian nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Pembuangan templat DNA (DNase I) |
Penyempurnaan keadaan IVT - pilihan |
Reka bentuk dan optimasi komponen tindak balas |
3-7 |
Ciri-ciri Kami
- Kaedah Pemodifikasian Nukleotida yang Berpelbagai
Pelbagai strategi pemodifikasian nukleotida pilihan boleh meningkatkan ungkapan protein.
- Sistem Tindak Balas yang Disedia
Capai nisbah transkripsi yang tinggi dan kecekapan penutupan yang tinggi.
- Proses Penutupan yang Stabil
Capai kadar penutupan lebih daripada 95%.
- Kawalan ketat terhadap RNase
Prevensi degradasi mRNA dengan cekap melalui kawalan tegas terhadap RNase dalam persekitaran eksperimen dan bahan habisan.
Kajian Kes
Yaohai Bio-Pharma telah membina platform proses penutupan bersama transkripsi yang masak, menggunakan kap analog bersih untuk menambah struktur Cap1 secara langsung sambil mengelakkan penutupan songsang. Selepas penjagaan sampel piawai dan pengesan elektroforesis kapiler (CE), kadar penutupan protein fluoresen hijau diperkuat (eGFP) mRNA boleh mencapai lebih daripada 95%.
kecekapan penutupan eGFP mRNA lebih daripada 95%
MRNA eGFP dan mRNA mCherry yang disiapkan melalui penutupan bersama transkripsi ditransfek ke dalam sel 293T masing-masing, dan isyarat bercahaya kuat diperhatikan selepas 48 jam, menyatakan bahawa mRNA dinyatakan dengan cekap dalam sel 293T.
Pengungkapan mRNA eGFP dan mRNA mCherry dalam Sel 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
