Откривање на Тайните на Висококвалитетната Екстракција на Плазмиди

Извлекувањето на плазмиди е критично за истражувачите. Како генски вектори, плазмидите се од житно значење во истражувањето на вакцини и генска терапија, каде што квалитетот има првостепено значење. Клучните фактори за квалитет вклучуваат пропорцијата на суперспирални и содржината на ендотоксини. Правилата се разликуваат: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, со <5% линеарна/отворено-циркуларна ДНК. Клиентите често предпочитаат ≥95% суперспирална. Нивата на ендотоксини се: за истражување (>50 ЕУ/µg), трансфекција (<50 ЕУ/µg), и без ендотоксини (<0.1 ЕУ/µg).

Суперспирална Плазмидна ДНК

Плазмидите од Escherichia coli вклучуваат суперспирална (SC), отворено-циркуларна (OC), и линеарна (L) ДНК. Висока пропорција на SC зголемува ефикасноста на трансфекцијата и изразувањето. На пример, трансфекцијата на плазмид со 85.45% SC е 2.5 пати поголема, а изразувањето на HGF на плазмид со 93.28% SC е 1.8 пати поголемо, што потврдува преварувањето на SC ДНК.

Отворено-циркуларна ДНК: Кога една нитка од двонитката ДНК се прекинува, суперспиралната структура станува растопчана, формирајќи отворено-циркуларен плазмид со поголем обем што се движи најбавно токму по електрофорезата и е позициона во врвот.

Линеарна ДНК: Кога и двата делови на плазмидната ДНК се прекинат, се формира линеарна структура со относно помал обем што се движи брзо од отворено-циркуларната ДНК, но повеќе од суперспиралната ДНК, позициона на второ место.

Суперспирална ДНК: Двата хеликси се заплетнати, формирајќи суперспирална структура базирана на ДНК хеликс. Тоа има најмалиот обем и се движи најбрзо по електрофорезата, позициона во долната страна.

Количествена анализа на пропорцијата на суперспиралната ДНК

Лабораториите користат агарозна гел електрофореза (AGE) и Gel-Pro Analyzer за да судат над пропорцијата на суперспиралната ДНК преку сликите од електрофорезата. Една слика покажува 97,539% СД ДНК, додека друга слика покажува 63,833% СД и 36,167% ОД ДНК (линеарната ДНК не е видлива).

Тајноста на ендотоксините во плазмидите

Ендотоксин е компонент од надворешниот слој на клетечката зид на Грам-негативните бактерии, кој се ослободува по бактеријино смрт или лизирање, и содржи токсичен липополисахарид А. Постојачки при извлачката на плазмидите, ендотоксинот влегува во лизатното решение, што го намалува ефикацитетот на трансфекцијата и го активира неспецифичниот имунен одговор, што може да доведе до лажно позитивни резултати во експериментите.

Количествена и Квалитативна Анализа на Ендотоксин

Тестот со Лимулус амебоцитен лизат (LAL) ја детектира ендотоксинин преку аглутинација со 2-кето-3-деоксиоктонова киселина (KDO) во липополисахаридот (LPS). Тој е квалитативен и полу-количествен, што го индикува присуството на ендотоксин преку коагулација или промена на бојата кога се меша со примероци.

Yaohai Bio-Pharma нуди ендотоксин-свободни суперкоилни плазмиди. Делегирањето на работа до Yaohai го подобрува ефикацитетот на трансфекцијата и експресијата. Доставуваните плазмиди имаат ≥95% СК пропорција (просечно 85%±10%) и нивоа на ендотоксин ≤0.1, ≤0.01 или ≤0.005 EU/μg.

Така исто активно бареме глобални партнери од институции или индивидууми. Нудиме најконкурентниот компензација во индустријата. Ако имате било кои прашања, не се колебајте да се обидете да ни kontaktirate: [email protected]