Отклучување на тајните на висококвалитетната екстракција на плазмиди

Екстракцијата на плазмидите е од клучно значење за истражувачите. Како генски вектори, плазмидите се од витално значење во истражувањето на вакцините и генската терапија, каде квалитетот е важен. Клучните фактори за квалитет вклучуваат превиткана пропорција и содржина на ендотоксин. Прописите се разликуваат: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, со <5% линеарна/отворено-кружна ДНК. Клиентите често претпочитаат ≥95% супернамотани. Нивоата на ендотоксин се: истражување (>50 ЕУ/µg), трансфекција (<50 ЕУ/µg) и без ендотоксини (<0.1 ЕУ/µg).

Превиткана плазмидна ДНК

Плазмидите од Escherichia coli вклучуваат суперсвиткана (SC), отворена кружна (OC) и линеарна (L) ДНК. Високиот процент на SC ја зголемува ефикасноста и експресијата на трансфекцијата. На пример, трансфекцијата на 85.45% SC плазмид е 2.5x повисока, а 93.28% SC плазмидната експресија на HGF е 1.8x повисока, што ја потврдува супериорноста на SC ДНК.

Отворена кружна ДНК: Кога една нишка на двоверижна ДНК се скрши, суперсвитканата структура станува лабава, формирајќи отворен кружен плазмид со поголем волумен кој мигрира најбавно за време на електрофорезата и се позиционира на врвот.

Линеарна ДНК: Кога двете нишки на плазмидната ДНК се распаѓаат, се формира линеарна структура, со релативно помал волумен што мигрира побрзо од отворената кружна ДНК, но побавно од суперсвитканата ДНК, позиционирана на второто место.

Превиткана ДНК: Две спирали се испреплетуваат, извртувајќи се во суперсвиткана структура базирана на спиралата на ДНК. Има најмал волумен и мигрира најбрзо за време на електрофорезата, позициониран на дното.

Квантитативна анализа на супернамотана пропорција

Лабораториите користат електрофореза со гел агароза (AGE) и Гел-Про анализатор за да ја проценат пропорцијата на суперсвиткана преку слики од електрофореза. Една слика покажува 97.539% SC ДНК, додека друга покажува 63.833% SC и 36.167% OC ДНК (линеарна ДНК не е видлива).

Тајната на ендотоксинот во плазмидите

Ендотоксинот е компонента на надворешниот слој на клеточниот ѕид на Грам-негативните бактерии, ослободени по бактериска смрт или лиза, кој содржи токсичен липополисахарид А. до лажни позитиви во експериментите.

Квантитативна и квалитативна анализа на ендотоксин

Тестот Limulus amebocyte lysate (LAL) го открива ендотоксинот преку аглутинација со 2-кето-3-деоксиоктонска киселина (KDO) во липополисахаридот (LPS). Тој е квалитативен и полуквантитативен, што укажува на присуство на ендотоксин преку коагулација или промена на бојата кога се меша со примероци.

Yaohai Bio-Pharma нуди супервиткани плазмиди без ендотоксини. Аутсорсингот на Јаохаи ја зголемува ефикасноста на трансфекцијата и изразувањето. Испорачаните плазмиди имаат ≥95% SC пропорција (просечно 85%±10%) и нивоа на ендотоксин ≤0.1, ≤0.01 или ≤0.005 EU/μg.

Исто така, активно бараме институционални или индивидуални глобални партнери. Ние нудиме најконкурентна компензација во индустријата. Ако имате какви било прашања, ве молиме слободно контактирајте не: [email protected]