Оптимизирање на процесот на чистење за рекомбинантен хуман инсулин

Во последните години, растечката на пациенти со дијабетес е стимулирала барањето за инсулин, но доступниот инсулин е во малку достапност. Ефикасното и економски уредно производство на инсулин е критично. Главно се производи преку Escherichia coli (E. coli) и мајченица поради брз раст и ниска цена, но E. coli се среќа со комплексен долен поток на обработка.

Преглед на долната обработка:

Чистењето на рекомбинантниот човеков инсулин од вклучувачките тела на E. coli вклучува многу чекори, вклучително опорабување, пране, растворување и оксидација, секвенцирање, замена на бафер, хроматографска чистења, кондензирање, ренатурација, ензимска секвенцирање и формулирање.

Yaohai Bio-Pharma се похвали на широка искуства во производството и чистењето на рекомбинантен инсулин, како и на тим од експерти, што осигурува дека вашето производство на инсулин ќе биде завршено со висока ефикасност. Со користење на нашите искуства од стотици проекти, Yaohai ласка да го подели како да се оптимизира процесот на долна чистења за рекомбинантен човеков инсулин.

Реконструција и пране на инклузиони тела:

Целите се разбиваат користејќи механички методи (на primer, ултразвучна обработка, високопретиска хомогенизација) или лизозам терапија, следени од пранjalни буфери (што го содржи уреум, Triton X-100, итн.) за отстранување на нечистотии. Правилно треба да се оптимизираат параметрите за време на пране, за да се осигура квалитетот на протеините додека се контролираат трошоците.

Солубилизирање и оксидација на инклузиони тела:

Користат се висококонцентрирани денатуранти (како што се гуанидин хлорид и уреум) за да се солубилизираат инклузионите тела, со додавање на дитиотретол или β-меркаптоетанол за предотвратување на формирање на погрешни ди сульфидни врски. pH и температурата значително влијаат врз реакциите на солубилизирање и оксидација.

Пресечување и замена на буфер:

Клетката со цијаноген бром е користена за отстранување на N-терминалниот почетен аминокиселин, но претставува токсични и нискоспецифични проблеми. Презамената на буфер ја отстранува штетната растворивина преку диализа, ултрафильтрација или хроматографија со исключување на величина, за да се подготви за последователните операции.

Хроматографска чистење и кристалнизација:

Множество хроматографски техники се користат за чистење на инсулин, вклучувајќи ги афинитетната хроматографија, ионската хроматографија, обратната фазна хроматографија, хидрофобната интеракциона хроматографија и хроматографијата со исключување на величина. Кристалнизацијата и методите на pH се користат за отстранување на загадувања и концентрирање на протеините.

Ренатурација:

Протеинот кој е растворен се разредува во ренатурационен буфер за да се подстимулира правилното формирање на дисулфидни врски и складување на протеин. Хроматографијата за складување на протеини и диализата се идентификуваат како методи за ренатурација.

Ензимско секење и формулирање:

Трипсинот и карбоксипептидазата B се користат за отсекување на C-пептидот, формирајќи активниот инсулин хетеродимер. На крај, се користат kristализација и лиофилезација за да се отстранат остатоците од соли и буфери, подготвувајќи стабилна формулација. Додаваат се специфични адитиви (како што се цинк и протамин) за да се задоволат различните клинички потреби.

Заклучок:

Долустрим обработка на инсулин од Е. coli е комплексна. Будешното фокусирање треба да биде врз оптимизација на овие чекори за ефикасна и икономска производство за да се задоволат барањата и за да се намалат трошоците.

Yaohai Bio-Pharma исто така активно ги бара светските партнерски институции или индивидуални партнери и нуди најконкурентното вознаграждување во индустријата. Ако имате било кои прашања, слободно ни kontaktirajte: [email protected]