Оптимизирање на процесот на прочистување за рекомбинантен хуман инсулин

Во последниве години, растот на пациентите со дијабетес ја поттикна побарувачката за инсулин, но достапен инсулин е во недостиг. Ефикасното, економично производство на инсулин е од клучно значење. Е.

Преглед на низводно обработка:

Прочистувањето на рекомбинантниот човечки инсулин од телата за вклучување на E. coli вклучува повеќе чекори, вклучувајќи обновување, миење, растворливост и оксидација, расцепување, размена на пуфер, хроматографско прочистување, таложење, ренатурација, ензимско расцепување и формулација.

Yaohai Bio-Pharma може да се пофали со долгогодишно искуство во производството и прочистувањето на рекомбинантниот инсулин, заедно со тим од експерти, што гарантира дека вашето производство на инсулин е завршено со висока ефикасност. Искористувајќи го нашето искуство од стотици проекти, Јаохаи љубезно резимира како да се оптимизира процесот на прочистување низводно за рекомбинантен хуман инсулин.

Вклучување на телото за обновување и миење:

Клетките се нарушуваат со помош на механички методи (како што се ултразвучно дејство, хомогенизација под висок притисок) или третман со лизозим, проследено со пуфери за перење (содржат уреа, Triton X-100 итн.) за отстранување на нечистотиите. За време на перењето, параметрите треба да се оптимизираат за да се обезбеди квалитет на протеинот додека се контролираат трошоците.

Инклузивно растворување и оксидација на телото:

Денатурантите со висока концентрација (како што се гванидин хидрохлорид и уреа) се користат за растворање на инклузивните тела, со додаден дитиотреитол или β-меркаптоетанол за да се спречи формирање на неправилни дисулфидни врски. рН и температурата значително влијаат на реакциите на растворливост и оксидација.

Расцепување и размена на бафери:

Расцепувањето на цијаноген бромид се користи за отстранување на N-терминалната иницијативна амино киселина, но тоа предизвикува проблеми со токсичност и ниска специфичност. Преку дијализа, ултрафилтрација или хроматографија со исклучување на големината, размената на пуфер ги отстранува штетните реагенси како подготовка за следните операции.

Хроматографско прочистување и врнежи:

За прочистување на инсулинот се користат повеќе хроматографски техники, вклучувајќи афинитетна хроматографија, хроматографија за размена на јони, хроматографија со обратна фаза, хроматографија со хидрофобна интеракција и хроматографија со исклучување на големината. Методите на таложење, како што се таложење на pH и кристализација на цинк, се користат за отстранување на нечистотиите и концентрирање на протеините.

Ренатурација:

Растворениот протеин се разредува во пуфер за ренатурација за да се промовира правилното формирање на дисулфидни врски и преклопување на протеините. Течна хроматографија и дијализа со преклопување на протеини се исто така методи кои се користат за ренатурација.

Ензимско расцепување и формулација:

Трипсин и карбоксипептидаза Б се користат за расцепување на C-пептидот, формирајќи го активниот инсулински хетеродимер. Конечно, кристализацијата и лиофилизацијата се користат за отстранување на преостанатите соли и пуфери, при што се подготвува стабилна формулација. Специфични адитиви (како што се цинк и протамин) се додаваат за да се задоволат различните клинички потреби.

Заклучок:

Низводно обработка на инсулин од E. coli е комплексен. Фокусот во иднина треба да биде на оптимизирање на овие чекори за ефикасно, економично производство за да се задоволи побарувачката и да се намалат трошоците.

Јаохаи Био-Фарма исто така активно бара институционални или индивидуални глобални партнери и нуди најконкурентна компензација во индустријата. Ако имате какви било прашања, ве молиме слободно контактирајте не: [email protected]