Иновативни техники на склопување за синтеза на гени од големи размери

Технологијата на склопување за синтеза на големи фрагменти на ДНК од нула е камен-темелникот на синтезата на гените, опфаќајќи методи како што се BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson склопување, CPEC и Overlap PCR. Поради ограничувањата на сегашната технологија за прецизно синтетизирање на ДНК на должината на генот во еден чекор, неопходно е да се комбинираат ин витро и ин виво техники на склопување за да се соберат фрагменти од олигонуклеотид синтетизирани во сегменти во долги ДНК фрагменти.

Ин витро техники на склопување

Тие се класифицирани во различни методи врз основа на големината на фрагментот и карактеристиките на низата, со заеднички услов за користење на ензими за алатки. Преклопувањето на PCR, базирано на методот на ДНК полимераза, е едноставно и брзо во работењето. Методите BioBrick и BglBrick, кои се потпираат на изошизомери, овозможуваат стандардизирано склопување, иако методот BioBrick е несоодветен за фузиони протеини. Методот на клонирање Golden Gate, базиран на ензими за ограничување од типот IIS, овозможува ефикасна беспрекорна лигатура на повеќе фрагменти. Методот на склопување Гибсон, кој користи комбинација од повеќе ензими за алатки, овозможува беспрекорно поврзување со големини на фрагменти кои достигнуваат неколку стотици kb. Стандардизираниот дизајн на компонентите на ДНК ја подобрува стапката на искористеност на постоечките фрагменти.

Ин виво техники на склопување

Иако ин витро собраните фрагменти можат да достигнат големина од неколку стотици kb, приносот е често недоволен, што бара засилување со користење на организми како што се Ешерихија коли. При склопување на фрагменти поголеми од 20 kb, често се користат рекомбинантни системи во организмите, вклучувајќи Bacillus subtilis, квасец и инженерски бактерии. Квасецот, како најчесто користен домаќин, е препознаен по својата ефикасна способност за хомологна рекомбинација многу години. Може да се користи за составување на вештачки хромозоми до неколку мегабази (Mb) во должина. Дополнително, Saccharomyces cerevisiae покажува извонредна толеранција за должината на хромозомот, обезбедувајќи теоретска основа за искористување на квасецот за изградба на ултра долги хромозоми во повисоките организми.

апликации

Yaohai Bio-Pharma примарно користи два методи на склопување за синтеза на гени: склопување лигаза и склопување на ДНК полимераза. Методот на склопување лигаза поврзува преклопувачки и хибридизирани 5'-фосфорилирани олигонуклеотидни фрагменти во двоверижна ДНК користејќи ДНК лигаза. Методот на склопување на полимераза користи ДНК полимераза за проширување на преклопувачките олигонуклеотидни фрагменти преку хибридизација, добивање мешавина од различни должини и на крајот засилување на успешно склопените фрагменти со целосна должина со помош на прајмери. Yaohai's може да им помогне на клиентите да ги задоволат специфичните барања во синтезата на гените.

Исто така, активно бараме институционални или индивидуални глобални партнери. Ние нудиме најконкурентна компензација во индустријата. Ако имате какви било прашања, ве молиме слободно контактирајте не: [email protected]