Иновативни Техники за АSEMBLIJA на Големи Скални Ген Синтеза

Технологијата за асемблирање на големи ДНК фрагменти од нула е основата на синтезата на гени, што вклучува методи како што се BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson асемблирање, CPEC и Overlap PCR. Због ограничението на моментната технологија да синтезира точно ДНК од должина на ген во еден чекор, неопходно е да се комбинираат in vitro и in vivo техники за асемблирање за да се асемблират олигонуклеотидни фрагменти, синтетизирани во делови, во долги ДНК фрагменти.

In vitro техники за асемблирање

Тие се класифицираат во различни методи според големината на фрагментот и карактеристиките на низовите, со заедничка захтевност за користење на инструментални ензими. Оверлап PCR, кој се заснова на методот на ДНК полимераза, е прост и брз во операцијата. БиоBrick и BglBrick методите, кои се надоверуваат на изосхизомерите, овозможуваат стандардизирана асемблеја, макото што БиоBrick методот не е пригоден за фузионски протеини. Златниот вртежен метод, кој се заснова на тип IIS рестрикциона ензими, дозволува ефикасен безшовен лигирање на множествени фрагмени. Гибсоновата метода на асемблеја, која користи комбинација од множествени инструментални ензими, овозможува безшовен лигирање со големини на фрагментите кои можат да достигнат неколку стотки кб. Стандардизирането дизајн на ДНК компонентите го зголемува степенот на употреба на постојачите фрагмени.

Техники за асемблеја во живо

Дури и во vitro асемблираните фрагмени можат да достигнат големина од неколку стотки кб, често производот е недостаточен, што го заисклува потребата за.amplification преку организми како Escherichia coli. При собирањето на фрагменти што надминуваат 20 кб, често се користат рекомбинантни системи во организми, вклучувајќи Bacillus subtilis, пекарски гриб и инженерирани бактерии. Пекарскиот гриб, како често употребуван домакин, годинава е признат поради неговата ефикасна способност за хомолошна рекомбинација. Тој може да се користи за собирање на арIFICИЧКИ хромозоми до неколку мегабази (Мб) во должина. Додатно, Saccharomyces cerevisiae прояви извонредна толеранција кон должината на хромозомите, што дава теоретска основа за користење на гриб за конструирање на свршено долги хромозоми во пошироки организми.

Апликации

Yaohai Bio-Pharma предводно користи два метода за монтаж при синтезата на гени: метод со лигаза и метод со ДНК полимераза. Методот со лигаза ја поврзува 5'-фосфорилираните олигонуклеотидни фрагменти, кои се преклопуваат и хибридизираат, во двојна низа ДНК користејќи ДНК лигаза. Методот со полимераза ги проширува олигонуклеотидните фрагменти преку хибридизација со помош на ДНК полимераза, добивајќи смеска од различни должини, и на крај ги зголемува успешно монтираните фрагменти со целна должина користејќи праймери. Yaohai може да помогне на клиентите да задоволат специфични барања при синтезата на гени.

Така исто активно бареме глобални партнери од институции или индивидууми. Нудиме најконкурентниот компензација во индустријата. Ако имате било кои прашања, не се колебајте да се обидете да ни kontaktirate: [email protected]