Искористување на моќта на Стратегијата за ферментација на Банката на федерални резерви

Pichia pastoris е широко користен во производството на различни хетерологни протеини. Технологијата за ферментација со висока клеточна густина (HCDF), имплементирана преку хранење Fed-Batch, успешно постигна големо производство на биофармацевтски производи и индустриски ензими. Во прецизно контролирани медиуми, користењето на HCDF технологијата може да се добијат рекомбинантни протеини со висок принос, висока активност и исплатливи.

Неодамнешните истражувања покажуваат дека преку стратегиите на HCDF, се прават напори да се зголеми производството и активноста на хетерологните протеини во Pichia pastoris. Технологијата HCDF овозможува без напор да се постигнат кластери на клетки на високо ниво во дефинирани медиуми, со што се овозможува стекнување на изобилни рекомбинантни протеини со зголемена активност и намалени трошоци преку HCDF. Сепак, изборот на соодветна HCDF стратегија за оптимизирање на изразувањето на високо ниво на специфични протеини во Pichia pastoris останува предизвик.

Ферментација со висока клеточна густина (HCDF)

Pichia pastoris се истакнува во производството на хетерологни протеини, фаворизирани за HCDF во автоматските биореактори. HCDF има 3 фази: серија на глицерол, хранење и индукција на метанол. Yaohai Bio-Pharma може да се пофали со повеќе од една деценија искуство во микробиолошка ферментација и има служено над 400 проекти. Компанијата поседува голема експертиза и добро развиена технологија, што и овозможува да користи различни стратегии за HCDF за да ја подобри ефикасноста на производството на протеини.

Метанолот служи и како поттикнувач на AOX1 и како извор на јаглерод, но неговата концентрација мора да се контролира за да се спречи токсичност. Оценувањето на различни стратегии за хранење со метанол е од клучно значење за оптимизирање на растот на Pichia pastoris и протеинската експресија

Стратегија за индукција на метанол

Во стратегијата за индукција на метанол со хранлива серија на HCDF, стратегиите за индукција засновани на состојба опфаќаат збир на контролни методологии кои го регулираат дополнителното додавање на метанол преку онлајн/офлајн или напред/назад контрола. Меѓу стратегиите за статистичка индукција, главните вклучуваат μ-стат, растворен кислород (DO)-стат, метанол-стат и биомаса-стат.

1.1 μ-стат

Стратегијата μ-stat ја одржува биомасата стабилна со контролирање на μ, помагање на репродуктивноста и проучување на ефектот на μ врз експресијата на протеините. Сепак, му недостига директна контрола на метанол и DO, со што се ризикува акумулација и генерирање ROS.

1.2 DO-stat

Стратегијата DO-stat индиректно ја регулира храната со метанол со контролирање на растворениот кислород за да се одржи оксигенацијата, но не ја фиксира концентрацијата на метанолот и стапката на раст, што може да влијае на проучувањето на протеинската експресија. Оксигенацијата претставува предизвик во аеробната ферментација, и додека дополнувањето на чист кислород може да биде скапо и токсично, зголемувањето на притисокот е поекономичен пристап кој исто така може да ја подобри активноста на протеините.

1.3 Метанол-стат

Несоодветната контрола на концентрацијата на метанол поставува ограничувања и за μ-stat и за DO-stat стратегиите. Статистичките стратегии за метанол, кои работат во режим на вклучување/исклучување, се склони кон флуктуации и немаат прецизност. Спротивно на тоа, PID контролерите нудат попрецизно регулирање на концентрацијата на метанол, зголемувајќи ја севкупната ефикасност на ферментацијата.

1.4 Биомаса-стат

Стратегијата за биомаса-стат ја дефинира врската помеѓу исхраната со биомаса и метанол, оптимизирајќи ја стапката на хранење со метанол за да го подобри приносот на протеини. Онлајн мониторингот на биомасата е попрактичен, а најпосакувана метода е проточна цитометрија. На скала од 1000 L, оптимизирањето на стапката на внесување на метанол значително ја подобрува ензимската активност, приносот и продуктивноста, надминувајќи ја ферментацијата во колбата.

Стратегија за заедничко хранење

Глицеролот, како промотор на AOX1 инхибитор, мора целосно да се конзумира пред индукција на метанол за да се избегне потиснување на производството на протеини. Ко-супстратите може да ја подобрат ензимската активност, но вишокот глицерол може да му наштети на растот и експресијата. Сорбитол, аскорбинска киселина, манитол и други може да го заменат глицеролот, намалувајќи го времето на протеолиза и одгледување и ја подобрува експресијата на протеините.

Банката на деформации бара усвојување соодветни методи на зачувување и поставување во соодветна средина за да се одржи стабилноста на карактеристиките на деформацијата. Yaohai Bio-Pharma може да ги исполни барањата за зачувување на резервите на глицерол (преку замрзнувачи со ултра ниска температура или течен азот) и зачувување на квасец и E. coli со сушење со замрзнување.

Стратегија предизвикана од ограничувања

Во Pichia pastoris, рестриктивните услови како ниска DO, концентрација на метанол и ограничување на кислородот ја зголемуваат експресијата на рекомбинантниот протеин. Условите ограничени со кислород го активираат промоторот AOX1 преку акумулација на метанол, зголемувајќи го производството на протеини додека ја намалува топлината. Индукцијата на ниски температури го подобрува приносот, активноста, стабилноста и одржливоста на клетките, но ги зголемува трошоците за ладење. Ограничувањето на pH и азот, исто така, помагаат во изразувањето, што бара претпазливост за да се избегнат оперативни проблеми. Ограничувањето на азот значително ја подобрува продуктивноста на специфичната протеин.

Јаохаи Био-Фарма исто така активно бара институционални или индивидуални глобални партнери и нуди најконкурентна компензација во индустријата. Ако имате какви било прашања, ве молиме слободно контактирајте не: [email protected]