Искористување на Снагата на Стратегијата за Ферментација во Режим на Поддржувачка Дозирање

Pichia pastoris е шiroко korистena vo proizvodstvoto na različni heterolozi proteini. Tehnologijata za Fermenacija so Visoka Celna Gostina (HCDF), implementirana preku Fed-Batch hrane, uspešno postigna velika skala na proizvodstvoto na biofarmacevtički preparati i industrijski enzimi. Vo točno kontrolirani sredini, upotrebateljnost na HCDF tehnologija može da dobie visoki rendimenti, visoka aktivnost i ekonomski efektivni rekombinanti proteini.

Skorošniot istražuvachek govorot ka deka kroz HCDF strategii se praviat napori za zгvраćаne na proizvodstvoto i aktivnost na heterolozi proteini vo Pichia pastoris. HCDF tehnologijata dozvoluva lесitо postignuvawe na visoki nivoи na celni grupe vo definirani sredini, taka da omogužuva dobivka na obilni rekombinanti proteini so poboljneta aktivnost i snizeni trošoci preku HCDF. Međutim, izborot na odgovorna HCDF strategija za optimizacija na visokonivoinsko izrazuvawe na specifični proteini vo Pichia pastoris ostava izaaz.

Fermenacija so Visoka Celna Gostina (HCDF)

Pichia pastoris се одликува во производството на хетеролошки белчини, што е предпочитано за HCDF во автоматски биореактори. HCDF има 3 фази: глицеролска партија, хранење и индукција со метanol. Yaohai Bio-Pharma се похвалува со повеќе од десет години искуство во микробното ферментирање и ја служила преку 400 проекти. Фирмата располага со широка експертиза и добро развиена технологија, што ѝ овозможува да користи различни стратегии за HCDF за да подобри ефикасноста на производството на белчини.

Метанолот служи како индуктор на AOX1 и како извор на углерод, но неговата концентрација мора да се контролира за да се спречи токсинозацијата. Евалуацијата на различни стратегии за хранење со метанол е критична за оптимизацијата на растежот на Pichia pastoris и изразувањето на белчините.

Стратегија за индукција со метанол

Во стратегијата на метанолна индукција со фед-батч HCDF, состојбените индуктивни стратегии обхватуваат набор од методологии за контрола што регулираат дополнителното додавање на метанол преку онлайн/оффлайн или напредно/назадно контрола. Сред статистичките индуктивни стратегии, главните вклучуваат μ-stat, Dissolved Oxygen (DO)-stat, methanol-stat и biomass-stat.

1.1 μ-stat

стратегијата μ-stat ја чува биомасата стабилна со контролирање на μ, што помага во воспроизводивоста и проучувањето на влијанието на μ врз изразувањето на протеин. Поради тоа, липши пресметан контрол над метанолот и DO, што може да ризикува накопување и генерирање на ROS.

1.2 DO-stat

Стратегијата DO-stat косвено регулира поднесувањето на метанол со контролирање на дисолвираното кислород за да се одржи кислородацијата, но не фиксира концентрацијата на метанол и растечкиот темп, што може да повлијае врз проучувањето на изразувањето на протеините. Кислородацијата представува предизвик во аеробната ферментација, и додавањето на чист кислород може да биде скапо и токсично, додека зголемувањето на притисок е поекономски пристап кој исто така може да ја зголеми активноста на протеините.

1.3 Methanol-stat

Недостаточен контрол над концентрацијата на метанол става ограничувања на стратегиите μ-stat и DO-stat. Методите Methanol-stat, кои работат во режим на on/off, се осетливи кон флуктуации и недостигуваат прецизност. Наспротив, PID контролери нудат посебна регулација на концентрацијата на метанол, што го зголемува целосниот ефект на ферментацијата.

1.4 Biomass-stat

Стратегијата biomass-stat дефинира односот помеѓу биомасата и хранењето со метанол, оптимизирајќи го темпот на хранење со метанол за да се зголеми придобивката од протеин. Онлајн надзорот на биомасата е попрактичен, а методот на флуидна цитометрија е предпочитен. На скала од 1000 литри, оптимизацијата на темпото за хранење со метанол значајно ја подобрува активноста на ензимите, придобивката и продуктивноста, превземајќи го ферментацијата во флакон.

Ко-хранење стратегија

Глицеролот, како инхибитор на AOX1 промотор, мора да биде потпунно извршен пред да се започне индукцијата со метанол, за да се избегне поддржување на производството на протеин. Сопствените субстрати можат да зголемат активноста на ензимите, но премногу глицерол може да штети растечкиот процес и изразувањето. Сорбитолот, аскорбинската киселина, маниitol и други можат да заместат глицеролот, намалувајќи протеолизата и времето за култивирање, и зголемувајќи го изразувањето на протеин.

Банката на штамбите захтева да се примаат приклопени методи за чување и поставување во одговарачкиот окружувајќи јаглен за да се одржи стабилноста на карактеристиките на штамбите. Yaohai Bio-Pharma може да исполнува потребите за чување на глицеринскиот залог ( преку ултра-ниски температури или течен азот) и чување на сушиње под вакуум за квасови и E. coli.

Стратегија со ограничување

Во Pichia pastoris, ограничувачките услови како што се ниска DO, концентрација на метanolот и ограничување на кислородот ја зголемуваат експресијата на рекомбинантни протеини. Кислородните ограничувања активираат AOX1 промотор преку натрупувanje на метanol, што го зголемува излезот на протеинот додека го намалува топлината. Индуцирањето на ниска температура зголемува добивката, активноста, стабилноста и живоста на клетките, но додава и трошоци за охлаждање. pH и ограничувањето на азотот исто така помогнуваат за експресијата, барајќи пажливост за да се избегнат оперативни проблеми. Ограничувањето на азотот значително го зголемува специфичкиот производителен капацитет на протеините.

Yaohai Bio-Pharma исто така активно ги бара светските партнерски институции или индивидуални партнери и нуди најконкурентното вознаграждување во индустријата. Ако имате било кои прашања, слободно ни kontaktirajte: [email protected]