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mRNA の 5' 末端にあるキャップ構造は、真核生物内での mRNA の効率的な翻訳、安定化、輸送において極めて重要な役割を果たします。in vitro 転写 (IVT) mRNA の場合、5' キャップは共転写キャッピングまたは酵素キャッピング プロセスのいずれかによって導入されます。IVT RNA に不可欠なコンポーネントである 5' キャップは、プロセス開発とバッチ リリース全体を通じて包括的な特性評価を必要とする重要な品質特性 (CQA) です。
Yaohai-Bio Pharma は、オリゴヌクレオチド スプリント (プローブ) 設計、RNase H 切断、IP-RP-イオン対逆相高性能液体クロマトグラフィー (IP-RP-HPLC)/液体クロマトグラフィー質量分析 (LC-MS)、データ分析を網羅した包括的な 5' キャッピング効率分析ソリューションを提供します。
WHO の規制上の考慮事項によると、「mRNA の構造の完全性は、mRNA の放出にとって重要な品質特性であると考えられています。したがって、mRNA の完全性、5' キャッピング効率、3' ポリ (A) テールの存在または長さなどの制御が必要です。」
分析 |
メソッド |
mRNA 5'キャッピング効率 |
L消化後のC-MS |
2'-O-メチルヌクレオチドとテトラデオキシリボヌクレオチドを組み込んだ切断プローブは、RNase H が存在する場合に特定の位置で相補的な RNA 鎖を切断する役割を果たします。この方法は、より大きな RNA フラグメントをターゲットに生成するのに非常に有用であることが証明されています。
mRNA の 5' 末端に相補的となるよう戦略的に設計されたビオチン化プローブは、RNase H と組み合わせて適用され、キャップ構造を持つ 5' 末端オリゴヌクレオチドの標的切断を触媒します。
オリゴヌクレオチド LC-MS 分析では、アミン移動相添加剤を使用したイオン対逆相 (IP-RP) 分離がクロマトグラフィー モードとして推奨されます。これは、優れた分解能と質量分析 (MS) との互換性によるものです。
m7GpppG キャップを特徴とする切断断片では、二リン酸、三リン酸、または非メチル化 G キャップ (GpppG) を持つ切断断片とは対照的に、明確な質量が観察されるため、それらの識別が容易になり、キャップ形成効率の推定が可能になります。
Yaohai-Bio Pharma は、オリゴヌクレオチド スプリント (プローブ) 設計、RNase H 切断、IP-RP-HPLC/LC-MS からデータ分析まで、mRNA キャッピング効率分析のための堅牢な方法を開発しました。
5'末端切断断片の全イオンクロマトグラム（左）とエレクトロスプレー質量スペクトル（右）
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