Dalam proses preparasi mRNA transkripsi in vitro (IVT), diperlukan DNA plasmid yang dilinearisasi sebagai template transkripsi IVT dengan bantuan T7 RNA polimerase. DNA plasmid berkualitas tinggi sangat penting untuk transkripsi in vitro.
Berdasarkan platform layanan persiapan plasmid yang matang, Yaohai Bio-Pharma dapat menawarkan layanan persiapan DNA plasmid linier dengan kemurnian tinggi dan standar tinggi untuk mencapai transkripsi IVT yang efisien.
Proses | Layanan Opsional | Detail Layanan | Periode Pengiriman (Hari Kerja) |
Persiapan plasmid melingkar | Sintesis gen | Sintesis gen (pihak ketiga) | 7-10 |
Amplifikasi plasmid | Amplifikasi plasmid | 2 | |
Ekstraksi plasmid | |||
Persiapan plasmid linier | Linearisasi dan pemurnian plasmid | Linearisasi plasmid | 1 |
Pemurnian DNA linearisasi | |||
Kontrol kualitas DNA plasmid | Kemurnian konsentrasi | Spektrofotometri ultraviolet (UV). | 1-2 |
Konformasi plasmid | Elektroforesis gel agarosa (AGE) | ||
Elektroforesis kapiler (CE) -opsional | |||
Identifikasi plasmid | Identifikasi enzim restriksi/ USIA |
Pemilihan metode linearisasi yang fleksibel
Optimalisasi metode ekstraksi dan pemurnian DNA untuk mencapai tingkat pemulihan yang tinggi.
Standar kontrol proses yang ketat, dengan tingkat konformasi superheliks sampel plasmid untuk penelitian lebih dari 80%.
Layanan persiapan dan kontrol kualitas berstandar tinggi dan efisiensi tinggi untuk memenuhi kebutuhan eksperimental.
Mengambil contoh produk mRNA_luciferase katalog Bio-Pharma Yaohai, sampel plasmid templat transkripsi (tingkat penelitian) memiliki rasio superheliks lebih dari 90%, rasio linierisasi mendekati 100%, dan rasio transkripsi berikutnya hingga 1:200 ( DNA plasmid linierisasi: mRNA).
mRNA_luciferase yang diperoleh melalui pembuatan plasmid linier sebagai templat ditransfusikan ke dalam sel 293T, dan aktivitas reaksi enzim-substrat dievaluasi 24 jam setelah transfeksi.
Sinyal aktivitas luciferase kuat yang jelas dapat dideteksi, yaitu, protein luciferase diekspresikan secara efisien, menunjukkan kemurnian templat transkripsi dapat sepenuhnya memenuhi persyaratan persiapan mRNA berkualitas tinggi.
Uji Rasio Plasmid Superkoil
Validasi Ekspresi mRNA luciferase In Vitro