Pembatasan ujung 5' adalah modifikasi penting dari mRNA. mRNA dengan struktur penutup, terutama struktur Cap1, memfasilitasi mRNA menghindari respons imun bawaan in vivo, sehingga menghasilkan translasi protein yang efisien.
Pembatasan enzimatik (metode dua langkah) adalah metode pembatasan mRNA konvensional, mirip dengan proses pembatasan pada organisme eukariotik. Di bawah aksi serangkaian enzim, 7-metilguanin (m7G) dihubungkan ke ujung 5' mRNA melalui ikatan trifosfat 5'-5' dan mengalami modifikasi metilasi untuk membentuk struktur tutup Cap 1 (m7GpppN).
Diagram pembentukan struktur tutup alami
Alur reaksi pembatasan enzimatik adalah sebagai berikut:
DNA plasmid linier digunakan sebagai cetakan untuk transkripsi in vitro (IVT) dengan adanya T7 polimerase, dan mRNA dengan struktur penutup ujung 5' terbentuk setelah pemurnian satu langkah menggunakan enzim capping vaksinia dan 2'-O -metiltransferase.
Detail Layanan
Layanan Opsional | Detail Layanan | Periode Pengiriman (Hari) |
pembatasan enzimatik mRNA | Reaksi pembatasan enzimatik | 1 |
Membatasi optimasi reaksi - opsional | Desain dan optimasi komponen reaksi | 3 ~ 7 |
Fitur kami
- Desain dan optimalisasi komponen reaksi pembatasan
Komponen reaksi pembatasan dioptimalkan, dan produksi transkrip mRNA meningkat pesat.
- Verifikasi ekspresi in vitro
MRNA yang tertutup ditransfusikan ke sel 293T, dan ekspresi protein target dapat dideteksi.
- Kontrol ketat terhadap RNase
Melalui kontrol ketat terhadap lingkungan eksperimental dan bahan habis pakai RNaseson, degradasi mRNA dapat dicegah secara efektif.
Studi kasus
Platform mRNA Yaohai Bio-Pharma telah membangun proses reaksi pembatasan yang sempurna.
Untuk mRNA eGFP, produk awal mRNA yang dibuat dengan pembatasan enzimatik, sinyal fluoresensi eGFP (fluoresensi hijau) pada tingkat tinggi dapat diamati setelah mentransfeksi sel 293T selama 24 jam, yang dideteksi oleh Western Blot (WB), menunjukkan bahwa protein target yang ditingkatkan protein fluoresen hijau (eGFP) dapat diekspresikan secara efisien secara in vitro.
Ekspresi mRNA eGFP yang Dibatasi Enzimatik di Sel 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
