Dibandingkan dengan pembatasan enzimatik dua langkah, metode pembatasan kotranskripsional satu langkah dapat mengurangi aliran proses secara signifikan. Metode ini berorientasi pada hasil dan melibatkan penambahan analog tutup pada reaksi transkripsi in vitro (IVT). Analog topi dapat diperkenalkan pada awal transkripsi, dan mRNA dengan struktur topi dapat diperoleh setelah transkripsi selesai. Analog cap generasi ketiga saat ini dapat menghindari pembatasan terbalik dan secara langsung menambahkan struktur Cap 1 ke produk transkripsi.
Untuk pertimbangan imunogenisitas mRNA in vivo dan efisiensi translasi, proses IVT sering mengadopsi jenis NTP tertentu yang dimodifikasi, dan nukleotida umum yang dimodifikasi adalah pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouri-dine (N1Ψ), dan 5-methylcytosine (5mC) .
Gambar: Diagram Reaksi Co-transkripsional dan Pembatasan mRNA
Detail Layanan
Pelayanan | Detail Layanan | Periode Pengiriman (Hari Kerja) |
Pembatasan ko-transkripsional | Respons transkripsional in vitro (analog Clean Cap) | 1-2 |
| Modifikasi nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC) |
| Penghapusan templat DNA (DNase I) |
Optimalisasi kondisi IVT - opsional | Desain dan optimasi komponen reaksi | 3-7 |
Fitur kami
- Strategi Modifikasi Nukleotida yang Diversifikasi
Berbagai strategi modifikasi nukleotida opsional dapat meningkatkan ekspresi protein.
- Sistem Reaksi yang Dioptimalkan
Mencapai rasio transkripsi yang tinggi dan efisiensi pembatasan yang tinggi.
Mencapai tingkat pembatasan lebih dari 95%.
- Kontrol Ketat terhadap RNase
Cegah degradasi mRNA secara efektif dengan mengontrol RNase secara ketat di lingkungan eksperimen dan bahan habis pakai.
Studi kasus
Yaohai Bio-Pharma telah membangun platform proses pembatasan co-transkripsional yang matang, menggunakan analog topi bersih untuk secara langsung menambahkan struktur Cap1 sambil menghindari pembatasan terbalik. Setelah pra-perawatan sampel standar dan deteksi elektroforesis kapiler (CE), tingkat pembatasan mRNA protein fluoresen hijau yang ditingkatkan (eGFP) dapat mencapai lebih dari 95%.
eGFP mRNA membatasi efisiensi lebih dari 95%
eGFP mRNA dan mCherry mRNA yang dibuat dengan co-transcriptional capping masing-masing ditransfusikan ke dalam sel 293T, dan sinyal fluoresen yang kuat diamati setelah 48 jam, menunjukkan bahwa mRNA diekspresikan secara efisien dalam sel 293T.
Ekspresi eGFP mRNA dan mCherry mRNA di Sel 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
