Mengenai produksi massal mRNA, transkripsi in vitro (IVT) adalah metode yang lebih efisien dan matang. Reaksi IVT mengadopsi DNA plasmid linierisasi yang mengandung promotor T7 sebagai templat, dan mRNA disintesis dengan nukleosida trifosfat (NTPs) sebagai substrat dengan adanya T7 RNA polimerase.
Modifikasi nukleotida merupakan terobosan dalam eksplorasi mRNA, dimana molekul mRNA yang tidak dimodifikasi dikenali oleh sensor RNA intraseluler untuk mengaktifkan imunitas bawaan. Untuk pertimbangan imunogenisitas mRNA in vivo dan efisiensi translasi, proses IVT biasanya menggunakan jenis NTP tertentu yang dimodifikasi, dan nukleotida umum yang dimodifikasi adalah pseudouridine (Ψ), N1-methyl-pseudouridine (N1Ψ), dan 5-methylcytosine (5mC).
Proses Transkripsi In Vitro mRNA
Diagram reaksi transkripsi in vitro (IVT).
Detail Layanan
Layanan Opsional | Detail Layanan | Periode Pengiriman (Hari Kerja) |
Transkripsi in vitro (IVT) | IVT, transkripsi in vitro | 1 |
| Modifikasi nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC, dll.) |
| Penghapusan templat DNA (DNase I) |
Optimalisasi kondisi IVT - opsional | Desain dan optimalisasi komponen reaksi IVT | 2-5 |
Fitur kami
- Strategi Modifikasi Nukleotida yang Diversifikasi
Meningkatkan stabilitas mRNA dan ekspresi protein in vivo.
- Desain dan Optimasi Pengujian yang Ketat
Persiapan fragmen mRNA hingga 10kb dapat dicapai.
Dengan mengoptimalkan kondisi reaksi IVT, laju transkripsi mencapai 1:200.
- Kontrol Ketat terhadap RNase
Kontrol ketat terhadap RNase melalui lingkungan eksperimental dan bahan habis pakai dapat secara efektif mencegah degradasi mRNA.
Studi kasus
Sistem reaksi IVT saat ini secara kasar dioptimalkan untuk sistem sintetik dengan panjang sekitar 100 nt, bukan untuk mRNA dengan panjang sewenang-wenang. Semakin panjang urutan mRNA, semakin sulit untuk ditranskripsi dan semakin rentan terhadap degradasi.
Untuk menyiapkan urutan mRNA yang disesuaikan dengan panjang sekitar 10 kb, Yaohai Bio-Pharma telah berhasil menyiapkan sampel berkualitas tinggi dengan rasio transkripsi tinggi 1:135 dan memperoleh 135 μg produk mRNA yang awalnya dimurnikan setelah 1 μg plasmid linierisasi ditranskripsi secara in vitro melalui desain eksperimental yang ketat, optimalisasi kondisi reaksi yang berkelanjutan, dan kontrol ketat terhadap RNase.
Identifikasi mRNA (Elektroforesis Gel Agarosa)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
