Yaohai Bio-Pharma menyiapkan circRNA berdasarkan sistem PIE (penyelarasan ekson dan intron), yang mengandalkan fungsi penyambungan mandiri intron tipe I untuk mencapai siklisasi RNA. Struktur PIE dirancang menggunakan gen T4 td atau gen prekursor tRNA mencurigakan, dan susunannya sebagai berikut:
Fragmen intron dan ekson pendukung RNA dibagi menjadi dua bagian (terminal 5' dan terminal 3'), dimana rangkaian terminal 5' dipindahkan ke ekor rangkaian target, rangkaian terminal 3' dimasukkan ke bagian depan. urutan target, dan urutan gen target disisipkan di tengah.
Di bawah katalisis GTP, struktur PIE mengarah pada siklisasi rangkaian selain intron. Dikombinasikan dengan strategi peningkatan laju siklisasi yang wajar, Yaohai Bio-Pharma dapat mencapai siklisasi rangkaian hingga 4 kb dengan laju siklisasi lebih dari 80%.
Gambar 1. Sirkulasi circRNA in vitro berdasarkan sistem PIE
Detail Layanan
| Proses | Layanan Opsional | Detail Layanan | Periode Pengiriman (hari kerja) |
| desain dan optimasi urutan sirkRNA | Desain dan optimalisasi urutan pengkodean | Penyelarasan urutan CDS Optimasi kodon CDS | 1 |
| Desain dan optimalisasi urutan non-coding | Desain dan optimasi urutan intron dan ekson Desain dan optimasi urutan lengan homolog Desain dan optimalisasi urutan spacer | 1-2 |
Strategi Umum untuk Desain Urutan mRNA
| Komponen CircRNA | Fungsi Biologis | Strategi Optimasi |
| Urutan intron dan ekson dua terminal | Penyambungan mandiri intron yang dikatalisis GTP untuk siklisasi urutan di luar intron. | Dirancang sesuai dengan gen T4 td atau gen prekursor tRNA minyak ikan. |
| Pengkodean | IRES | Situs pengenalan ribosom internal yang mengatur terjemahan circRNA. | Penapisan urutan situs entri ribosom internal (IRES) dari sumber virus yang berbeda, misalnya sumber EMCV, CVB3. |
| CDS | Daerah pengkode protein, urutan yang mengkode antigen, antibodi, atau protein fungsional lainnya. | Optimalisasi kodon meningkatkan tingkat terjemahan; kodon tertentu yang tidak optimal mungkin berperan dalam pelipatan protein. |
| Non-kode | Urutan non-coding | Targetkan miRNA atau protein untuk mengerahkan regulasi gen atau protein. | Menargetkan situs pengikatan spesifik untuk miRNA atau protein dapat mengulangi urutan situs pengikatan. |
Fitur kami
- Kombinasi Sistem Siklisasi PIE yang Dioptimalkan dengan strategi optimasi yang masuk akal untuk mencapai tingkat siklisasi lebih dari 80%;
- Kerjasama Tim Pengoptimalan CDS yang mutakhir dengan tim algoritma AI profesional untuk menyelesaikan optimalisasi kodon wilayah CDS;
- SircRNA Proses yang Matang dan Sempurna dapat dicapai dengan efisiensi siklisasi yang tinggi, stabilitas tinggi, dan efisiensi translasi yang tinggi.
Studi kasus
Yaohai Bio-Pharma meluncurkan produk kontrol circRNA Enhanced Green Fluorescent Protein (eGFP), yang didasarkan pada sistem PIE untuk mencapai siklisasi RNA.
Menggunakan reagen transfeksi konvensional, eGFP circRNA ditransfusikan ke dalam sel 293T, dan sinyal fluoresen eGFP (hijau) dapat dideteksi setelah 24 jam, yang akan ditingkatkan setelah 48 jam. Sinyal fluoresen masih dapat dideteksi pada hari ke 7 dan hari ke 14 setelahnya. transfeksi.
Validasi ekspresi in vitro dari eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
TIDAK
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
