penutupan ujung 5'- adalah modifikasi esensial dari mRNA. mRNA dengan struktur penutup, terutama struktur Cap1, membantu mRNA menghindari respons imun bawaan dalam tubuh, yang menghasilkan translasi protein yang efisien.
Penutupan enzimatik (metode dua langkah) adalah metode konvensional untuk penutupan mRNA, serupa dengan proses penutupan dalam organisme eukariotik. Di bawah aksi serangkaian enzim, 7-metilguanin (m7G) dihubungkan ke ujung 5'- dari mRNA melalui ikatan trifosfat 5'-5' dan menjalani modifikasi metilasi untuk membentuk struktur penutup Cap 1 (m7GpppN).
Diagram pembentukan struktur penutup alami
Alur reaksi penutupan enzimatik adalah sebagai berikut:
DNA plasmid linear digunakan sebagai templat untuk transkripsi in vitro (IVT) dalam kehadiran polimerase T7, dan mRNA dengan struktur kap ujung 5' terbentuk setelah pemurnian satu langkah menggunakan enzim penutup vaccinia dan 2'-O-metiltransferase.
Detail Layanan
Layanan Opsional |
Detail Layanan |
Periode Pengiriman (hari) |
penutupan Enzimatik mRNA |
Reaksi penambahan kap enzimatik |
1 |
Optimasi reaksi penambahan kap - opsional |
Desain dan optimasi komponen reaksi |
3~7 |
Fitur Kami
- Desain dan optimasi komponen reaksi penambahan kap
Komponen reaksi penambahan kap dioptimalkan, dan produksi transkrip mRNA meningkat secara signifikan.
- Verifikasi ekspresi in vitro
MRNA yang ditutupi dengan kap ditransfeksikan ke sel 293T, dan ekspresi protein target dapat dideteksi.
- Kontrol Ketat terhadap RNase
Melalui kontrol ketat terhadap RNase pada lingkungan eksperimen dan konsumsi, degradasi mRNA secara efektif dicegah.
Studi Kasus
Platform mRNA Yaohai Bio-Pharma telah membangun proses reaksi capping yang sempurna.
Untuk mRNA eGFP, pre-produk mRNA yang disiapkan melalui penutupan enzimatik, sinyal fluoresensi eGFP (fluoresensi hijau) pada tingkat tinggi dapat diamati setelah mentransfeksi sel 293T selama 24 jam, yang dideteksi oleh Western Blot (WB), menunjukkan bahwa protein target enhanced green fluorescent protein (eGFP) dapat diekspresikan dengan efisien secara in vitro.
Ekspresi mRNA eGFP Penutupan Enzimatik di Sel 293T
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
