Mengenai produksi massal mRNA, transkripsi in vitro (IVT) adalah metode yang lebih efisien dan matang. Reaksi IVT menggunakan plasmid DNA yang telah dilinierkan dan mengandung promotor T7 sebagai template, dan mRNA disintesis dengan nukleosida trifosfat (NTPs) sebagai substrat dalam kehadiran polimerase RNA T7.
Modifikasi nukleotida merupakan terobosan dalam penelitian mRNA, di mana molekul mRNA tanpa modifikasi dikenali oleh sensor RNA intraseluler untuk mengaktifkan imunitas bawaan. Untuk pertimbangan imunogenisitas mRNA in vivo dan efisiensi translasi, proses IVT biasanya menggunakan beberapa jenis NTP yang dimodifikasi, dan nukleotida dimodifikasi yang umum adalah pseudouridin (Ψ), N1-metil-pseudouridin (N1Ψ), dan 5-metil-sitosin (5mC).
Proses Transkripsi in vitro mRNA
Diagram reaksi transkripsi in vitro (IVT)
Detail Layanan
Layanan Opsional |
Detail Layanan |
Periode Pengiriman (hari kerja) |
Transkripsi in vitro (IVT) |
IVT, Transkripsi in vitro |
1 |
| Modifikasi nukleotida (Ψ/N1Ψ/5mC, dll.) |
| Penghilangan templat DNA (DNase I) |
Optimasi kondisi IVT - opsional |
Desain dan optimasi komponen reaksi IVT |
2-5 |
Fitur Kami
- Strategi Modifikasi Nukleotida yang Beragam
Meningkatkan kestabilan mRNA dan ekspresi protein in vivo.
- Desain dan Optimasi Uji yang Ketat
persiapan fragmen mRNA hingga 10kb dapat dicapai.
Dengan mengoptimalkan kondisi reaksi IVT, laju transkripsi dapat mencapai hingga 1:200.
- Kontrol Ketat terhadap RNase
Kontrol ketat terhadap RNase melalui lingkungan eksperimen dan konsumsi dapat secara efektif mencegah degradasi mRNA.
Studi Kasus
Sistem reaksi IVT saat ini secara kasar dioptimalkan untuk sistem sintetis dengan panjang sekitar 100 nt, bukan untuk mRNA dengan panjang sembarang. Semakin panjang urutan mRNA, semakin sulit untuk ditranskripsikan dan semakin rentan terhadap degradasi.
Untuk menyiapkan urutan mRNA yang disesuaikan dengan panjang sekitar 10 kb, Yaohai Bio-Pharma telah berhasil menyiapkan sampel berkualitas tinggi dengan rasio transkripsi tinggi 1:135 dan memperoleh 135 μg produk mRNA yang telah dimurnikan awal setelah 1 μg plasmid linear ditranskripsikan secara in vitro melalui desain eksperimen yang ketat, optimasi berkelanjutan kondisi reaksi, dan kontrol ketat terhadap RNase.
identifikasi mRNA (Elektroforesis Gel Agarosa)
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
