Mengenai persiapan batch prekursor RNA, metode yang sering digunakan adalah transkripsi in vitro (IVT). Reaksi IVT menggunakan plasmid DNA yang dilinierkan dan mengandung promotor T7 sebagai template dan mensintesis prekursor RNA dengan nukleosida trifosfat (NTPs) sebagai substrat dalam kehadiran polimerase RNA T7.
Metode siklizasi in vitro mencakup ligasi kimia, ligasi enzimatik, dan metode intron-ekspon terpermutasi (PIE). Ligasi kimia dan ligasi enzimatik cocok untuk siklizasi RNA yang lebih pendek. Ketika fragmen lebih besar dari 100 nt, laju siklizasinya akan sangat berkurang. Sebaliknya, metode nuklease berbasis sistem PIE dapat mencapai siklizasi urutan 8 kb.
Di bawah katalisis guanosin trifosfat (GTP), struktur PIE mengalami siklizasi urutan ekstraintron. Dengan strategi yang tepat untuk meningkatkan laju siklizasi, Yaohai Bio-Pharma dapat mencapai siklizasi hingga urutan 4 kb dengan efisiensi siklizasi lebih dari 80%.
Reaksi siklizasi RNA in vitro berlangsung sebagai berikut:
Prekursor RNA disintesis melalui transkripsi in vitro, dan komponen PIE menyelesaikan self-splicing di bawah katalisis GTP untuk membentuk circRNA.
Detail Layanan
| Proses |
Detail Layanan |
Periode Pengiriman (hari kerja) |
| Transkripsi in vitro dan Sirkulasi |
Konfirmasi sistem reaksi |
1-2 |
| Reaksi Transkripsi In Vitro dan Siklitisasi |
| Pencernaan RNase R |
| Optimasi reaksi |
Komposisi Reaksi, Optimisasi Waktu |
2-5 |
Fitur Kami
- Desain dan Optimasi Uji yang Ketat
Siklizasi RNA hingga 4 kb dapat dicapai.
- Efisiensi siklizasi tinggi
Tingkat siklizasi lebih dari 80% dapat dicapai melalui strategi pengoptimalan urutan yang rasional.
- Kontrol Ketat terhadap RNase
Melalui pengendalian ketat terhadap RNase dalam lingkungan eksperimen dan konsumsi, degradasi RNA secara efektif dicegah.
Studi Kasus
Siklisasi in vitro dan pengayaan circRNA
Berdasarkan sistem PIE, Yaohai Bio-Pharma telah mengoptimalkan urutan circRNA, dengan tingkat siklisasi lebih dari 80% melalui elektroforesis gel agarosa (AGE). Menggunakan RNase R untuk mengaya circRNA, hasil elektroforesis E-gel menunjukkan bahwa prekursor RNA linear tercerna, dan setelah pemurnian lebih lanjut, sebagian besar circRNA yang terbelah dapat dihilangkan. Larutan pemurnian dikembangkan sendiri oleh Yaohai Bio-Pharma.
Sirkulasi in vitro dan pengayaan circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
