MRNA lingkaran (circRNA) telah banyak digunakan dalam penelitian tentang fungsi gen atau protein. Selain itu, circRNA juga populer dalam pengembangan biologis pencegahan dan terapi, serupa dengan mRNA.
Yaohai Bio-Pharma telah mengembangkan serangkaian teknologi sintesis circRNA untuk menyediakan RNA berkualitas tinggi, seperti desain dan optimasi urutan, transkripsi in vitro (IVT), pengikatan/penggelangan, pemurnian, dan pembungkus lipid nanopartikel (LNP). Semua produk dirilis berdasarkan standar kontrol kualitas (QC) yang ketat.
Dibandingkan dengan mRNA linear, RNA lingkaran (circRNA) lebih stabil dalam struktur dan merupakan titik panas utama dalam penelitian obat asam nukleat saat ini. Ini memiliki berbagai aplikasi di bidang yang berbeda, baik sebagai circRNA koding maupun non-koding, termasuk vaksin pencegahan untuk penyakit menular, vaksin onkologi terapeutik, obat onkologi terapeutik, terapi penggantian protein, kedokteran regeneratif, terapi sel dan gen (CGT), peran spons molekuler, dan aptamer RNA.
Proses | Layanan Opsional | Detail Layanan | Periode Pengiriman (hari) |
desain dan Optimisasi Sekuen circRNA | Desain dan optimasi deretan kode | Optimisasi Kodon CDS | 1 |
Desain dan optimasi urutan non-kode | Desain dan Optimisasi Intron dan Sekuen Ekson, Lengan Homolog, dan Spacer | 1-2 | |
Persiapan Plasmid Lingkaran | Sintesis gen | Sintesis Gen (Pihak Ketiga) | 7-10 |
Amplifikasi Plasmid | Amplifikasi Plasmid | 2 | |
Ekstraksi Plasmid | |||
Persiapan Plasmid Linear | Linearisasi dan purifikasi plasmid | Linearisasi plasmid | 1 |
Purifikasi DNA Linear | |||
Transkripsi In Vitro dan Siklitisasi | Transkripsi In Vitro dan Siklitisasi | Reaksi Transkripsi In Vitro dan Siklitisasi | 1-2 |
Pencernaan RNase R | |||
Optimisasi-opsional | Komposisi Reaksi, Optimisasi Waktu | 2-5 | |
pemurnian circRNA | Metode Pemurnian Konvensional | Pengendapan Klorida Litium | 1 |
Pemurnian Butiran Magnetik | 1 | ||
Pemurnian circRNA yang Sangat Murni | Kromatografi Likuid Prestasi Tinggi Praparatif (HPLC) | 1-2 | |
Pertukaran buffer | Ultrafiltrasi | 1 | |
liofilisasi circRNA | Pengisian Sampel | Pengisian | 2-3 |
Liofilisasi | Pra-pembekuan | ||
Pengeringan utama (sublimasi) | |||
Pengeringan sekunder (desorpsi) | |||
penyampulan circRNA-LNP | Enkapsulasi LNP | Pra-pengolahan Bahan dan Cairan | 2 |
Pencampuran Perangkat Mikrofluidik | |||
Pertukaran buffer | Filtrasi Aliran Tangensial | 1 | |
Mosterilkan | Penyaringan | ||
Kontrol Kualitas Plasmid DNA | Konsentrasi/kemurnian | Spektrofotometri Ultraviolet (UV) | 1-2 |
Konformasi Plasmid | Elektroforesis Gel Agarosa (AGE) | ||
Elektroforesis Kapiler (CE)-Opsional | |||
Identifikasi Plasmid | Identifikasi Enzim Restriksi/AGE | ||
Kontrol Kualitas circRNA | Konsentrasi/kemurnian | Spektrofotometri Ultraviolet (UV) | - |
Kekayaan | Elektroforesis Gel Agarosa (AGE)/E-Gel | 0.5 | |
HPLC-opsional | 1 | ||
Kontrol Kualitas circRNA-LNP | Efisiensi encapsulasi | Metode RiboGreen | 1 |
Ukuran Partikel | Pencaran Cahaya Dinamis (DLS) | 1 | |
Indeks Polidispersitas | Pencaran Cahaya Dinamis (DLS) | 1 | |
Potensial Zeta | Pencaran Cahaya Dinamis (DLS) | 1 | |
Uji Kekuatan Berbasis Sel | Transfeksi Sel | Penanaman sel, transfeksi sel | 4 |
Pendeteksian Protein Target | Pengamatan fluoresensi, Western Blot/ELISA | 1-3 |
Kami mentransfeksikan circRNA protein fluorescent hijau ditingkatkan (eGFP circRNA), mCherry circRNA, luciferase circRNA ke dalam sel 293T, dan mendeteksi protein target melalui sinyal fluoresen, luminescen, atau warna, western blot (WB), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).
Uji Kekuatan Berbasis Sel Sampel circRNA oleh Yaohai Bio-Pharma