Yaohai Bio-Pharma menyiapkan circRNA berdasarkan sistem PIE (penyelarasan ekson dan intron), yang bergantung pada fungsi self-splicing dari tipe I intron untuk mencapai siklisasi RNA. Struktur PIE dirancang menggunakan gen T4 td atau gen prekursor tRNA ikan, dan susunannya adalah sebagai berikut:
Intron RNA dan fragmen ekson pendukung dibagi menjadi dua bagian (terminal 5' dan terminal 3'), di mana urutan terminal 5' dipindahkan ke ekor urutan target, urutan terminal 3' disisipkan di depan urutan target, dan urutan gen target disisipkan di tengah.
Di bawah katalisis GTP, struktur PIE mengarah pada siklitisasi urutan selain intron. Dengan strategi peningkatan laju siklitisasi yang masuk akal, Yaohai Bio-Pharma dapat mencapai siklitisasi urutan hingga 4 kb dengan laju siklitisasi lebih dari 80%.
Gambar 1. Sirkulasi in vitro circRNA berdasarkan sistem PIE
Detail Layanan
| Proses |
Layanan Opsional |
Detail Layanan |
Periode Pengiriman (hari kerja) |
| desain dan optimasi urutan circRNA |
Desain dan optimasi deretan kode |
Penjajaran urutan CDS
Optimisasi Kodon CDS
|
1 |
| Desain dan optimasi urutan non-kode |
Desain dan optimasi urutan intron dan ekson
Desain dan optimasi urutan lengan homolog
Desain dan optimasi urutan spacer
|
1-2 |
Strategi Umum untuk Desain Urutan mRNA
| Komponen CircRNA |
Fungsi Biologis |
Strategi Optimasi |
| Urutan intron dan ekson dua-terminal |
Splicing mandiri intron yang didorong GTP untuk siklisasi urutan di luar intron. |
Dirancang berdasarkan gen T4 td atau prekursor tRNA minyak ikan. |
| Pengkodean |
IRES |
Situs pengenalan ribosom internal yang mengatur terjemahan circRNA. |
Penyaringan barisan situs masuk ribosom internal (IRES) dari sumber virus yang berbeda, misalnya EMCV, sumber CVB3. |
| CDS |
Wilayah pengkodean protein, barisan yang mengkode untuk antigen, antibodi atau protein fungsional lainnya. |
Optimasi kodon meningkatkan tingkat terjemahan; beberapa kodon non- optimal mungkin memainkan peran dalam pelipatan protein. |
| Tidak berkoding |
Barisan tidak berkoding |
Menargetkan miRNA atau protein untuk melaksanakan regulasi gen atau protein. |
Menargetkan situs ikatan spesifik untuk miRNA atau protein dapat mengulangi barisan dari situs ikatan tersebut. |
Fitur Kami
- Sistem Siklisasi PIE yang Dioptimalkan dengan strategi optimasi yang rasional untuk mencapai tingkat siklisasi lebih dari 80%;
- Kerjasama Tim Optimalisasi CDS Terdepan dengan tim algoritma AI profesional untuk menyelesaikan optimalisasi kodon daerah CDS;
- Proses circRNA yang Matang dan Sempurna dapat dicapai dengan efisiensi siklisasi tinggi, stabilitas tinggi, dan efisiensi translasi tinggi.
Studi Kasus
Yaohai Bio-Pharma meluncurkan produk kontrol protein enhanced green fluorescent protein (eGFP) circRNA, yang didasarkan pada sistem PIE untuk mencapai siklisasi RNA.
Menggunakan reagen transfeksi konvensional, eGFP circRNA ditransfeksikan ke sel 293T, dan sinyal fluoresen eGFP (hijau) dapat terdeteksi setelah 24 jam, yang akan diperkuat setelah 48 jam. Sinyal fluoresen masih dapat terdeteksi pada hari ke-7 dan hari ke-14 setelah transfeksi.
Validasi ekspresi in vitro dari eGFP circRNA
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
