Signifikansi Asam Kepekaan mRNA
Dengan perkembangan pesat vaksin mRNA dan terapi, diperlukan panel analisis tertentu untuk menguji kepekaan (mendefinisikan aktivitas biologisnya), yang melibatkan efisiensi translasi mRNA. Metode-metode ini biasanya didasarkan pada transfeksi sel dan asam kepekaan fungsional dari protein target.
Yaohai Bio-Pharma menawarkan asam kepekaan berbasis sel untuk zat obat mRNA atau produk LNP, termasuk transfeksi sel (293T, HepG2, HeLa, K562, U937, Raw264.7 sel, dll.) dan asam ELISA atau Western Blotting (WB).
Persyaratan Regulasi untuk Asam Kepekaan
Menurut pertimbangan regulasi WHO, “Kekuatan setiap lot vaksin akhir harus ditentukan menggunakan metode fungsional yang kuantitatif dan divalidasi dengan sesuai. Potensi uji in vitro potensial dapat mencakup sistem transfeksi berbasis sel atau uji tanpa sel.” Dan USP merekomendasikan “uji berbasis sel” untuk menguji kekuatan mRNA, yaitu, ekspresi protein target.
Prosedur
Langkah 1. Transfeksi Berbasis Sel dengan mRNA atau mRNA-LNP
Sel dipelihara dan ditransfeksikan dengan mRNA atau mRNA-LNP. Secara rinci, mRNA ditransfeksikan setelah dicampur dengan reagen transfeksi, sedangkan mRNA-LNP ditransfeksikan langsung ke dalam sel. Setelah 24-48 jam, klarifikasi supernatant yang mengandung protein terexprsikan dengan sentrifugasi.
Langkah 2. Uji Fungsional dari Protein Target
Lakukan uji ELISA atau WB untuk menilai ikatan fungsional dari protein target.
Studi Kasus
Uji Kekuatan Berbasis Sel pada Sampel mRNA
Yaohai-BioPharma telah mengembangkan metode uji kekuatan berbasis sel untuk mRNA, yang melibatkan budidaya sel, transfeksi sel, dan uji fungsional protein. Kami mentransfeksikan eGFP mRNA, mCherry mRNA, luciferase mRNA, spike protein mRNA ke dalam sel 293T, dan mendeteksi protein target melalui sinyal fluoresensi, luminesensi, atau warna, WB, ELISA.
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
