Integritet mRNA
Značaj analize integriteta mRNA
mRNA su prepoznate po svojoj inherentnoj nestabilnosti i podložne su fragmentaciji u prisutnosti vanjskih faktora, posebno tijekom in vitro transkripcije (IVT) i procesa pročišćavanja, gdje sveprisutne nukleaze predstavljaju izazov. Procjena integriteta mRNA ključna je u kasnijem razvoju lijekova na bazi mRNA, osiguravajući i sigurnost i dostupnost proizvoda.
Yaohai-BioPharma pruža sveobuhvatne usluge testiranja integriteta mRNA, koristeći metode kao što su elektroforeza u agaroznom gelu (AGE), kapilarna elektroforeza (CEG) i tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti (HPLC), pridržavajući se rigoroznih standarda kvalitete za istraživanja i klinička ispitivanja.
Regulatorni zahtjevi za integritet mRNA
Prema regulatornim razmatranjima WHO-a, “integritet strukture mRNA smatra se kritičnim atributom kvalitete za otpuštanje mRNA. Stoga je potrebna kontrola integriteta mRNA, postotka intaktne mRNA, postotka fragmenata mRNA i tako dalje.”
Analitička metoda
Analiza |
Metode |
cjelovitost mRNA |
AGE, Agarozagel elektroforeza |
CGE,Kapilarna elektroforeza |
CGE-LIF, Kapilarna gel elektroforeza sa svjetlom induciranom fluorescencijom |
Integritet mRNA elektroforezom u agaroznom gelu
Elektroforeza u agaroznom gelu široko je korištena tehnika za procjenu integriteta ukupne RNA. To uključuje provođenje uzorka RNA na denaturirajućem agaroznom gelu, obojenom etidijevim bromidom ili SYBR Greenom. Denaturirajući gel, sastavljen od agaroze, olakšava odvajanje RNK na temelju veličine kada se primijeni električna struja. Kako negativno nabijena RNA migrira prema pozitivnom kraju gela, manji fragmenti pomiču se brže, što rezultira sortiranjem molekula RNA na temelju veličine.
Integritet mRNA kapilarnom gel elektroforezom
Kapilarna gel elektroforeza (CGE) predstavlja analitički pristup visoke razlučivosti koji je ključan za mjerenje integriteta molekula RNA prema duljini. Ova procjena ima značaj za osiguranje kvalitete, razumijevanje potencije i optimizaciju proizvodnih procesa. Slično elektroforezi u agaroznom gelu, CGE koristi električnu struju za odvajanje fragmenata RNK na temelju njihovog naboja i veličine. U CGE-u, kapilara je ispunjena matricom gela za odvajanje prožetom fluorescentnom bojom. Kretanje RNA duž kapilare ovisi o njezinoj veličini, a detekcija se postiže korištenjem ultraljubičastih (UV) ili fluorescencijskih (LIF) detektora.
EN
