mRNA:n eheys
mRNA:n eheysanalyysin merkitys
mRNA:t tunnistetaan niiden luontaisesta epästabiilisuudesta ja ne ovat herkkiä fragmentoitumiselle ulkoisten tekijöiden läsnä ollessa, erityisesti in vitro -transkription (IVT) ja puhdistusprosessien aikana, joissa kaikkialla esiintyvät nukleaasit ovat haaste. mRNA:n eheyden arviointi on ratkaisevan tärkeää myöhemmässä mRNA-pohjaisten lääkkeiden kehittämisessä, mikä varmistaa sekä turvallisuuden että tuotteiden saatavuuden.
Yaohai-BioPharma tarjoaa kattavia mRNA:n eheyden testauspalveluita, joissa käytetään menetelmiä, kuten agaroosigeelielektroforeesia (AGE), kapillaarielektroforeesia (CEG) ja korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa (HPLC), jotka noudattavat tiukkoja laatustandardeja sekä tutkimuksessa että kliinisissä kokeissa.
Sääntelyvaatimukset mRNA:n eheydelle
WHO:n säädösten mukaan "mRNA:n rakenteen eheyttä pidetään kriittisenä laatutekijänä mRNA:n vapautumiselle. Näin ollen tarvitaan mRNA:n eheyden, ehjän mRNA:n prosenttiosuuden, mRNA-fragmenttien prosenttiosuuden ja niin edelleen valvontaa.
Analyyttinen menetelmä
analyysi |
Menetelmät |
mRNA:n eheys |
AGE, Agarosegelektroforeesi |
CGE,Kapillaarielektroforeesi |
CGE-LIF, kapillaarigeelielektroforeesi valon indusoimalla fluoresenssitunnistuksella |
mRNA:n eheys agaroosigeelielektroforeesilla
Agaroosigeelielektroforeesi on laajalti käytetty tekniikka kokonais-RNA:n eheyden arvioimiseksi. Tämä sisältää RNA-näytteen ajamisen denaturoivalla agaroosigeelillä, joka on värjätty joko etidiumbromidilla tai SYBR Greenillä. Agaroosista koostuva denaturoiva geeli helpottaa RNA:n erottumista koon perusteella, kun käytetään sähkövirtaa. Kun negatiivisesti varautunut RNA siirtyy kohti geelin positiivista päätä, pienemmät fragmentit liikkuvat nopeammin, mikä johtaa RNA-molekyylien kokoon perustuvaan lajitteluun.
mRNA:n eheys kapillaarigeelielektroforeesilla
Kapillaarigeelielektroforeesi (CGE) on korkearesoluutioinen analyyttinen lähestymistapa, joka on keskeinen RNA-molekyylien eheyden mittaamisessa pituuden perusteella. Tällä arvioinnilla on merkitystä laadunvarmistuksen, tehon ymmärtämisen ja valmistusprosessien optimoinnin kannalta. Samoin kuin agaroosigeelielektroforeesi, CGE käyttää sähkövirtaa RNA-fragmenttien erottamiseen niiden varauksen ja koon perusteella. CGE:ssä kapillaari täytetään erotusgeelimatriisilla, johon on infusoitu fluoresoivaa väriainetta. RNA:n liike kapillaaria pitkin riippuu sen koosta, ja havaitseminen tapahtuu ultravioletti (UV) tai valon aiheuttaman fluoresenssidetektorin (LIF) avulla.
EN
