LNP-lipidikoostumuksen tunnistaminen ja määrä
LNP-lipidikoostumusanalyysin merkitys
Lipidinanohiukkaset (LNP:t), jotka käsittävät kationisen lipidin, kolesterolin, fosfolipidin ja PEG-konjugaattilipidin, toimivat mRNA-lääketuotteiden merkittävinä kuljetusjärjestelminä. LNP:iden stabiilius ja kaksikerroksinen juoksevuus riippuvat formulaatiojärjestelmässä käytettyjen eri lipidien ominaisuuksista ja pitoisuuksista. Lipidien koostumus on erittäin tärkeä sen kannalta, kuinka hyvin LNP:t kuljettavat lääkkeitä.
Yaohai-BioPharma tarjoaa ratkaisuja mRNA-LNP-lipidikoostumuksen tunnistamiseen ja kvantifiointiin käyttämällä korkean suorituskyvyn nestekromatografiaa varautuneen aerosolin havaitsemismenetelmällä (HPLC-CAD).
Lipidikoostumusta koskevat sääntelyvaatimukset
WHO:n lainsäädännöllisten näkökohtien mukaan "Rokotteen lopullinen koostumus, lipidit mukaan lukien, tulee kuvata sekä komponenttien määrä kussakin pakkauksessa."
Analyyttinen menetelmä
analyysi |
Menetelmät |
Lipidikoostumus |
HPLC yhdistettynä Corona Charged Aerosol Detectoriin (CAD) |
menettely
Vaihe 1. Lipidinäytteen valmistus
Laimennusaineen valinta on ensiarvoisen tärkeää mRNA-LNP-lääketuotteiden lipidikomponenttien analysoinnissa. Laimennusaineen tulisi liuottaa tehokkaasti jokainen lipidikomponentti ja häiritä kaikki lipidien ja kapseloidun mRNA:n väliset vuorovaikutukset. Mahdollisia laimennusaineita ovat etanoli, etanoli/dimetyylisulfoksidi (DMSO), etanoli/formamidi, etanoli/trietyyliamiiniasetaatti ja muut.
Vaihe 2. HPLC-CAD
Käänteisfaasinestekromatografia (RP-HPLC) yhdistettynä varattuun aerosolidetektoriin (CAD) on sisällytetty LNP-lipidikoostumustestaukseen. Koska lipideiltä puuttuu kromoforeja eivätkä ne absorboi ultraviolettisäteilyä (UV) ilman johdannaista, haihtuminen on tyypillisesti haastavaa. CAD, koska se on herkempi, pystyy erottamaan laajemman kirjon lipidipitoisuutta. Aikaisemmin valmistettiin ultrakorkean erotuskyvyn nestekromatografia (UHPLC) yhdistettynä varautuneeseen aerosolidetektoriin (CAD) ja sitä käytettiin lipidianalyysissä pienten häiritsevien RNA- (siRNA) LNP-tutkimuksissa.
Vaihe 3. Tietojen analysointi
Kunkin lipidin määrä näytteessä sisälsi laskelmia, jotka oli johdettu standardikäyrästä kerrottuna laimennuskertoimella. Tämä prosessi tuotti lipidipitoisuuden kullekin mRNA-LNP-näytteen aineosalle.
Tapaus LNP-lipidikoostumusanalyysistä HPLC-CAD:llä
Yaohai-BioPharma on kehittänyt HPLC-CAD:iin perustuen vankan menetelmän mRNA-LNP:n lipidikomponenttien analysointiin. Tämä menetelmä validoitiin olevan lineaarinen, toistettava, tarkka, tarkka ja spesifinen LNP-formulaatioille, mikä voisi tukea prosessin kehitystä, formulaatiokehitystä, stabiilisuustestausta ja mRNA-LNP:n vapautumista.
4 lipidin kromatografinen profiili Yaohai-BioPharman HPLC-CAD-menetelmällä
Yaohai-BioPharman HPLC-CAD-menetelmän lineaarisuus (R2＞0.99)
EN
