mRNA terviklikkus
mRNA terviklikkuse analüüsi tähtsus
mRNA-sid tunnustatakse nende loomupärase ebastabiilsuse tõttu ja nad on vastuvõtlikud killustamisele väliste tegurite juuresolekul, eriti in vitro transkriptsiooni (IVT) ja puhastusprotsesside ajal, kus kõikjal esinevad nukleaasid on väljakutseks. MRNA terviklikkuse hindamine on mRNA-põhiste ravimite edasisel väljatöötamisel ülioluline, tagades nii ohutuse kui ka toote kättesaadavuse.
Yaohai-BioPharma pakub laiaulatuslikke mRNA terviklikkuse testimise teenuseid, kasutades selliseid meetodeid nagu agaroosgeelelektroforees (AGE), kapillaarelektroforees (CEG) ja kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia (HPLC), järgides rangeid kvaliteedistandardeid nii uuringute kui ka kliiniliste uuringute jaoks.
Regulatiivsed nõuded mRNA terviklikkusele
WHO regulatiivsete kaalutluste kohaselt peetakse mRNA struktuuri terviklikkust mRNA vabanemise kriitiliseks kvaliteediatribuudiks. Seega on vaja kontrollida mRNA terviklikkust, puutumata mRNA protsenti, mRNA fragmentide protsenti ja nii edasi.
Analüütiline meetod
Analüüs |
Meetodid |
mRNA terviklikkus |
AGE, Agaroosgelektroforees |
CGE,Kapillaarelektroforees |
CGE-LIF, kapillaargeelelektroforees valguse indutseeritud fluorestsentsi tuvastamisega |
mRNA terviklikkus agaroosigeeli elektroforeesi abil
Agaroosgeelelektroforees on laialdaselt kasutatav tehnika kogu RNA terviklikkuse hindamiseks. See hõlmab RNA proovi käivitamist denatureerival agaroosgeelil, mis on värvitud kas etiidiumbromiidi või SYBR Greeniga. Agaroosist koosnev denatureeriv geel hõlbustab elektrivoolu rakendamisel RNA eraldamist suuruse alusel. Kui negatiivselt laetud RNA migreerub geeli positiivse otsa suunas, liiguvad väiksemad fragmendid kiiremini, mille tulemuseks on RNA molekulide suurusepõhine sorteerimine.
mRNA terviklikkus kapillaargeelelektroforeesi abil
Kapillaargeelelektroforees (CGE) on kõrge eraldusvõimega analüütiline lähenemisviis, mis on keskne RNA molekulide terviklikkuse mõõtmiseks pikkuse järgi. See hinnang omab tähtsust kvaliteedi tagamisel, tõhususe mõistmisel ja tootmisprotsesside optimeerimisel. Sarnaselt agaroosgeeli elektroforeesiga kasutab CGE RNA fragmentide eraldamiseks nende laengu ja suuruse alusel elektrivoolu. CGE-s täidetakse kapillaar eraldusgeelmaatriksiga, mis on infundeeritud fluorestsentsvärviga. RNA liikumine piki kapillaari sõltub selle suurusest ja tuvastamine saavutatakse ultraviolettkiirguse (UV) või valguse indutseeritud fluorestsentsi (LIF) detektorite abil.
EN
