Επιταγή συνθέσεως saRNA
Το αυτοαναπαραγωγικό mRNA (saRNA), επίσης γνωστό ως replicon RNA, κωδικοποιεί ακολουθίες IVT (in vitro transcription) mRNA και γονίδια ιονογενούς replicase που προέρχονται από αλφαβίρους ή φλαβιβίρους. Τα γονίδια ιονογενούς replicase επιτρέπουν την αυτοαναπαραγωγή του mRNA, που αποτελεί αποτέλεσμα αυξημένη έκφραση πρωτεΐνης και ελάχιστη απαιτούμενη δόση RNA σε σύγκριση με τα μη αναπαραγωγικά mRNAs. Ένα άλλο στοιχείο είναι ότι το saRNA είναι ένα σχετικά μεγάλο μόριο (πάνω από 14 kb).
Το Yaohai Bio-Pharma έχει αναπτύξει μια σειρά τεχνολογιών σύνθεσης mRNA για να παρέχει μη επιδεινωτικό mRNA και αυτοεπιδεινωτικό mRNA (1000 nt~14000 nt), όπως σχεδιασμός και βελτιστοποίηση ακολουθιών, IVT, καθαρισμός, λυοφιλισμός και περιβάλλον σε λιπιδικά νανοσωματίδια (LNP). Όλα τα προϊόντα απελευθερώνονται με αυστηρά πρότυπα ελέγχου ποιότητας.
Σχήμ.1 Χαρακτηριστικά δομής των IVT mRNAs: Συνηθισμένο, Κυκλικό και Αυτοεπιδεινωτικό mRNA.
Χαρακτηριστικά ακολουθίας του αυτοεπιδεινωτικού mRNA
Το αυτοανιχνεύσιμο RNA αποτελείται από τέσσερις μη δομικές πρωτεΐνες (ονομάζονται ως nsP1, nsP2, nsP3 και nsP4), οι οποίες προέρχονται από αλφαβίρους, ειδικά τον ιό Venezuelan equine encephalitis virus (VEEV). Μεταξύ αυτών, η nsP1 παρουσιάζει δύο ενζυματικές δραστηριότητες, συγκεκριμένα GTase και N7MTase, ενώ η nsP2 έχει RTPase δραστηριότητα, κάτι πολύ σημαντικό για την κάλυψη του IVT mRNA προκειμένου να δημιουργηθεί η δομή Cap 0. Επιπλέον, η nsP2 λειτουργεί ως πρωτεϊνολύτικο ένζυμο και helicase, βοηθώντας στην περίπλοκη επεξεργασία του συνόλου του nsP πλέξματος. Η ακριβή λειτουργία της nsP3 παραμένει απορία, αλλά συμμετέχει σε αλληλεπιδράσεις με διάφορες πρωτεΐνες κυττάρων φιλοξενού, συνεισφέροντας έτσι στη μειούση της αντιφθορικής απόκρισης που ενεργοποιεί ο φιλοξενός.
Ένας περιοχής υπογεννήτριας προωθητικής δύναμης (SGP) των αλφαβίρων βρίσκεται πριν από το γονίδιο ενδιαφέροντος (GOI). Το στοιχείο SGP επιτρέπει την έναρξη της μεταγωγής του GOI, παρακάμπτοντας την ανάγνωση της ακολουθίας που κωδικοποιεί τις πρωτεΐνες nsP του ιού.
Σχήμ.2 Σύνθεση και κυτταρικές δοκιμές eGFP saRNA της Yaohai Bio-Pharma RNASci Platform.
Περιστομένες Λύσεις saRNA
Το πρωτόκολλο σύνθεσης του saRNA είναι παρόμοιο με αυτό του mRNA: Περιστατική Σύνθεση mRNA
- Σχεδιασμός Ακολουθίας
- Προετοιμασία Πλάσμιδας-Προtypo
- μεταφορά in vitro (IVT)
- ένζυματική Καποποίηση mRNA
- συνδυασμένη Καποποίηση κατά την Εγγραφή mRNA
- καθαρισμός mRNA
- αποψύχωση mRNA
- Ενκάψυμα LNP
- Ανάλυση και Δοκιμασία
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
