Ontsluit die geheime van hoëgehalte-plasmiedekstraksie

Plasmied-ekstraksie is van kardinale belang vir navorsers. As geenvektore is plasmiede noodsaaklik in entstofnavorsing en geenterapie, waar kwaliteit saak maak. Sleutel kwaliteit faktore sluit in supercoiled proporsie en endotoksien inhoud. Regulasies verskil: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, met <5% lineêre/oopsirkulêre DNA. Kliënte verkies dikwels ≥95% supercoiled. Endotoksienvlakke is: navorsing (>50 EU/µg), transfeksie (<50 EU/µg), en endotoksienvry (<0.1 EU/µg).

Supergedraaide plasmied DNA

Plasmiede van Escherichia coli sluit supergedraaide (SC), oopsirkelvormige (OC) en lineêre (L) DNS in. Hoë SC-verhouding verhoog transfeksie-doeltreffendheid en uitdrukking. Byvoorbeeld, 'n 85.45% SC plasmied se transfeksie is 2.5x hoër, en 'n 93.28% SC plasmied se HGF uitdrukking is 1.8x hoër, wat SC DNA se superioriteit bevestig.

Oopsirkelvormige DNS: Wanneer een string dubbelstrengs DNS breek, raak die supergedraaide struktuur los en vorm 'n oopsirkelvormige plasmied met 'n groter volume wat die stadigste migreer tydens elektroforese en aan die bokant geplaas is.

Lineêre DNS: Wanneer beide stringe van plasmied DNS breek, vorm 'n lineêre struktuur, met 'n relatief kleiner volume wat vinniger migreer as oopsirkelvormige DNS, maar stadiger as supergedraaide DNS, tweede geposisioneer.

Supergedraaide DNS: Twee helikse verstrengel en draai in 'n supergedraaide struktuur gebaseer op die DNS-heliks. Dit het die kleinste volume en migreer die vinnigste tydens elektroforese, aan die onderkant geposisioneer.

Kwantitatiewe Analise van Supercoiled Proporsie

Laboratoriums gebruik agarose gel elektroforese (AGE) en Gel-Pro Analyzer om supercoiled proporsie te beoordeel via elektroforese beelde. Een beeld toon 97.539% SC DNA, terwyl 'n ander 63.833% SC en 36.167% OC DNA toon (lineêre DNA nie sigbaar nie).

Die geheim van endotoksien in plasmiede

Endotoksien is 'n komponent van die buitenste laag van die selwand van Gram-negatiewe bakterieë, vrygestel na bakteriële dood of lise, wat toksiese lipopolisakkaried A bevat. Tydens plasmiedekstraksie gaan endotoksien die lysisoplossing binne, wat transfeksie-doeltreffendheid beïnvloed en nie-spesifieke immuunresponse veroorsaak, wat lei tot tot vals positiewe in eksperimente.

Kwantitatiewe en kwalitatiewe analise van endotoksien

Die Limulus amebosiet lysaat (LAL) toets bespeur endotoksien deur agglutinasie met 2-keto-3-deoksioktonsuur (KDO) in die lipopolisakkaried (LPS). Dit is kwalitatief en semi-kwantitatief, wat die teenwoordigheid van endotoksien deur stolling of kleurverandering aandui wanneer dit met monsters gemeng word.

Yaohai Bio-Pharma bied endotoksienvrye supergedraaide plasmiede. Uitkontraktering aan Yaohai verhoog die doeltreffendheid van transfeksie en uitdrukking. Afgelewerde plasmiede het 'n ≥95% SC proporsie (gemiddeld 85%±10%) en endotoksienvlakke ≤0.1, ≤0.01 of ≤0.005 EU/μg.

Ons is ook aktief op soek na institusionele of individuele globale vennote. Ons bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, voel asseblief vry om ons te kontak: [email protected]