Optimalisering van E. coli selfintegriteit vir biotegnologiese produksie

In die veld van biowegweringsmiddele speel Escherichia coli (E. coli) 'n lewensbelangrike rol as gasheer vir die uitdrukking van rekombinante proteïene. Die selintegriteit van E. coli is kruisig vir proteïeënyield, gehalte en produksiekoste. Hierdie integriteit behels hoofsaaklik die struktuur en funksie van die binne- (IM) en buitemembraan (OM).

Yaohai Bio-Pharma het 15 jaar ondervinding in E. coli fermantasie en die uitdrukking van rekombinante proteïene. Ons gebruik verskeie strategieë om hoë E. coli sellintegriteit te handhaaf, waardoor die plasmidyield meer as 1g/L bedra in 'n kweeksiel van 30 ure. Deur op ons wydverspreide ondervinding in mikrobiële uitdrukking terug te kom, het Yaohai Bio-Pharma verskeie doeltreffende strategieë samengevat om die sellintegriteit van E. coli tydens biowegweringsmiddelproduksie te moniteer en verbeter.

Tegnieke vir die monitering van sellintegriteit van E. coli

Flow Cytometrie: Maak gebruik van fluoreserende verfstowwe om selstate te onderskei, soos propidium iodide vir die opsporing van selparaatbaarheid en SYTO9 vir die asse van OM-doorlatendheid. Dit vereis egter hoë koste van verfstowwe en komplekse bewerkings.

Kleurmetriese Metodes: Spieël selle lise deur die opsporing van DNA-inhoud, ensiemaktiwiteite, ens., in die oorskoot, soos met die PicoGreen reagensietoestel en alkaliese fosfaatas aktiwiteitstoetse. Hierdie metodes is egter moeilik en vereis duur reagensies.

Hoë-Werkstukvloeistofkromatografie: Gebruik vir aflynopsporing van buite-selse produk-konsentrasies om OM-vloei aan te wys. Sy outomatisering is egter kompleks en die analise tyd is lank.

Vibrasie Spektroskopie Tegnieke: Soos naby-infrarood en middel-infrarood spektroskopie, wat potensiële toepassings het, maar spektrale interferensie en data-analise uitdagings moet oorkome word.

Dielektriese spektroskopie: Evalueer membranintegriteit deur die impedansie van sel-suspensies te meet, wat reële tydsonlyne toetsing moontlik maak. Dit is egter vatbaar vir storing en kalibrasie is moeilik.

Biosensore: Kan stowwe wat uit selle of die periplasma uitlek opspoor, maar kry probleme soos moeilike senserherstel.

Viskositeit- en digtheidmetings: Laag in koste en vinnig in analise, maar ontbreek selektiwiteit en vereis die oorweging van meerbatchdata vir beoordeling.

Faktore wat cellulêre integriteit beïnvloed

Strein ingenieurswese: Verander OM-integriteit deur genetiese ingenieurswese, soos die mutasie van lipoproteïnegene, maar kan strein groei beïnvloed.

Gewild stres: Ooruitdrukking van rekombinante proteïne lei tot 'n metaboliese belasting, wat selse fisiologie beïnvloed. Dus is redelike regulering van uitdrukkingsvlakke nodig.

Substraatvoerkoers: Beide te hoë en te lae voerkoerse beïnvloed sellysing en OM-integriteit.

Temperatuur en Aerasie: Hoë temperature en lae suurstofbeskikbaarheid verhoog uitdrukkings-stres en OM-lekking, onderskeidelik, maar die spesifieke effekte wissel.

Osmotika: Gebruik om periplasmiese proteïene te vrylaat, maar skade selviabiliteit, wat hul toepassing beperk.

Gevolgtrekking Toekomstige navorsing moet verdieper ingaan op die meganismes en toestande van membraanreparasie om presies celmembraanintegriteit te beheer. Die optimering van monitoreermetodes en die ontleding van invloedsfaktore word verwag om produk-kwaliteit te verbeter, wat die ontwikkeling van die biotekenindustrie sal voortdryf.

Ons soek ook aktief instellings- of individuele wêreldwye partners. Ons bied die mees mededingersvermoënde vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, aarzel nie om ons te kontak nie by [email protected]