Optimalisering van E. coli-sellulêre integriteit vir biofarma-produksie

Op die gebied van biofarmaseutika speel Escherichia coli (E. coli) 'n belangrike rol as gasheer vir die uitdrukking van rekombinante proteïene. Die sellulêre integriteit van E. coli is deurslaggewend vir proteïenopbrengs, kwaliteit en produksiekoste. Hierdie integriteit behels hoofsaaklik die struktuur en funksie van die binnemembraan (IM) en buitenste membraan (OM).

Yaohai Bio-Pharma het 15 jaar in E. coli fermentasie en uitdrukking van rekombinante proteïen. Ons gebruik verskeie strategieë om hoë E. coli sellulêre integriteit te behou, die plasmiedopbrengs oorskry 1g/L binne 'n verbouingsiklus van 30 uur. Met behulp van die uitgebreide ervaring in mikrobiese uitdrukking, het Yaohai Bio-Pharma verskeie effektiewe strategieë opgesom om die sellulêre integriteit van E. coli tydens biofarmaseutiese produksie te monitor en te verbeter.

Tegnieke vir die monitering van sellulêre integriteit van E. coli

Vloeisitometrie: Gebruik fluoresserende kleurstowwe om sellulêre toestande te onderskei, soos propidiumjodied vir die opsporing van sellewensvatbaarheid en SYTO9 vir die assessering van OM-deurlaatbaarheid. Dit vereis egter die hoë koste van vlekke en komplekse operasies.

Kolorimetriese Metodes: Reflekteer sellise deur DNA-inhoud, ensiemaktiwiteite, ens., in die supernatant op te spoor, soos die gebruik van die PicoGreen-reagensstel en alkaliese fosfatase-aktiwiteittoetse. Hierdie metodes is egter omslagtig en vereis duur reagense.

Hoëprestasie-vloeistofchromatografie: Word gebruik vir vanlyn opsporing van ekstrasellulêre produkkonsentrasies om OM-lekkasie te bepaal. Tog is die outomatisering daarvan kompleks en die ontledingstyd is lank.

Vibrasie-spektroskopie-tegnieke: Soos naby-infrarooi en middel-infrarooi spektroskopie, wat potensiële toepassings het, maar die oorkoming van spektrale interferensie en data-analise-uitdagings vereis.

Diëlektriese spektroskopie: Evalueer membraanintegriteit deur die impedansie van selsuspensies te meet, wat intydse aanlynmonitering moontlik maak. Dit is egter vatbaar vir inmenging en kalibrasie is moeilik.

Biosensors: Kan verbindings opspoor wat van binne selle of die periplasma gelek word, maar ondervind probleme soos sensorregenerasieprobleme.

Viskositeit- en Digtheidsmetings: Lae koste en vinnig in ontleding, maar gebrek aan selektiwiteit en vereis die oorweging van multi-batch data vir beoordeling.

Faktore wat sellulêre integriteit beïnvloed

Stamingenieurswese: Verander OM-integriteit deur genetiese ingenieurswese, soos muterende lipoproteïengene, maar kan stamgroei beïnvloed.

Geïnduseerde stres: Ooruitdrukking van rekombinante proteïene lei tot 'n metaboliese las, wat sellulêre fisiologie beïnvloed. Daarom is redelike regulering van uitdrukkingsvlakke nodig.

Substraatvoedingtempo: Beide buitensporige hoë en lae voedingstempo's beïnvloed sellise en OM-integriteit.

Temperatuur en belugting: Hoë temperature en lae suurstofbeskikbaarheid verhoog onderskeidelik uitdrukkingstres en OM-lekkasie, maar die spesifieke effekte verskil.

Osmotika: Word gebruik om periplasmiese proteïene vry te stel, maar beskadig sellewensvatbaarheid, wat hul toepassing beperk.

Gevolgtrekking Toekomstige navorsing moet dieper in die meganismes en toestande van membraanherstel delf om die sellulêre membraanintegriteit presies te beheer. Die optimering van moniteringsmetodes en die ontleding van beïnvloedende faktore sal na verwagting produkkwaliteit verbeter en sodoende die ontwikkeling van die biofarmaseutiese industrie aandryf.

Ons is ook aktief op soek na institusionele of individuele globale vennote. Ons bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, voel asseblief vry om ons te kontak by [email protected]