Innovatiewe Monteertegnieke vir Groot-skaalse Genetiekssintese

Die monteertechnologie vir die sintese van groot DNA-fragmentte vanaf nul is die hoeksteen van gen-sintese, wat metodes insluit soos BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson-montage, CPEC en Overlap PCR. As gevolg van die beperkings van huidige tegnologie om DNA van genlengte akkuraat in een stap te sintetiseer, is dit nodig om in vitro en in vivo montaagetechnieke te kombineer om oligonukleotiedfragmentte wat in segmente gesintetiseer is, in lange DNA-fragmentte te monteer.

In vitro montaagetechnieke

Hulle word in verskeie metodes geklassifiseer na mate van fragmentgrootte en volgordekenmerke, met 'n algemene vereiste vir die gebruik van huldenzyme. Oorlap PCR, wat op die DNA polimerase-metode berus, is eenvoudig en vinnig in bewerkstelliging. Die BioBrick- en BglBrick-metodes, wat op isoschizomere vertrou, maak gestandaardiseerde samestelling moontlik, alhoewel die BioBrick-metode ongeskik is vir fusionsproteine. Die Golden Gate-klooningsmetode, wat op tipe IIS beperkingsenzyme berus, maak effektiewe naadlose ligasie van meerdere fragments moontlik. Die Gibson-assambleermetode, wat 'n kombinasie van verskeie huldenzyme gebruik, maak naadlose ligasie moontlik met fragmentgrootte wat verskeie honderde kb kan bereik. Die gestandaardiseerde ontwerp van DNA-komponente verbeter die gebruiksfrequentie van bestaande fragments.

In vivo assambleetechnieke

Hoewel in vitro assambleerde fragments kan grootte van verskeie honderde kb bereik, maar die opbrengs is dikwels ontoereikend, wat vermeerdering deur organisme soos Escherichia coli. By die samestelling van fragments wat 20 kb oorskry, word herkombinante stelsels binne organisme vaak gebruik, insluitend Bacillus subtilis, gister en gemodifiseerde bakterieë. Gister, as 'n algemeen gebruikte gasheer, is reeds vir jare bekend om sy doeltreffende homologiese rekombinasievermoë. Dit kan gebruik word om kunsmatige kromosome tot verskeie megabase (Mb) lank te samestel. Verder vertoon Saccharomyces cerevisiae 'n buitengewone toleransie vir kromosome lengte, wat 'n teoretiese grondslag verskaf vir die gebruik van gister om ultra-lange kromosome in hoër organisme te bou.

Toepassingsareas

Yaohai Bio-Pharma gebruik hoofsaaklik twee monteermetodes vir gentsintese: ligase-montage en DNA-polimerase-montage. Die ligase-montagemetode verbind ooreenstemmende en hibridiseerde 5'-fosforyleerde oligonukleotiedfragment in dubbelvou-dna deur middel van dna-ligase. Die polimerase-montagemetode maak gebruik van dna-polimerase om die ooreenstemmende oligonukleotiedfragment te verleng deur hibridisering, wat 'n mengsel van verskillende lengtes verkry, en uiteindelik die suksesvolle volle lengte fragmente met behulp van prymer uitvergroot. Yaohai kan kliënte help om spesifieke vereistes in gentsintese te voldoen.

Ons soek ook aktief instansiële of individuele wêreldwye partners. Ons bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As u enige vrae het, aarzel asb nie om ons te kontak nie: [email protected]