Innoverende samestellingstegnieke vir grootskaalse genesintese

Die samestellingstegnologie vir die sintetisering van groot DNA-fragmente van nuuts af is die hoeksteen van geensintese, wat metodes soos BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson-samestelling, CPEC en Overlap PCR insluit. As gevolg van die beperkings van huidige tegnologie om DNA van geenlengte akkuraat in 'n enkele stap te sintetiseer, is dit nodig om in vitro en in vivo samestellingstegnieke te kombineer om oligonukleotiedfragmente wat in segmente gesintetiseer is in lang DNA-fragmente saam te stel.

In vitro samestelling tegnieke

Hulle word geklassifiseer in verskeie metodes gebaseer op fragment grootte en volgorde eienskappe, met 'n algemene vereiste vir die gebruik van gereedskap ensieme. Oorvleueling-PKR, gebaseer op die DNA-polimerase-metode, is eenvoudig en vinnig in werking. Die BioBrick- en BglBrick-metodes, wat op isoskizomere staatmaak, maak gestandaardiseerde samestelling moontlik, al is die BioBrick-metode ongeskik vir samesmeltingsproteïene. Die Golden Gate-kloningsmetode, gebaseer op tipe IIS-beperkingsensieme, laat doeltreffende naatlose afbinding van veelvuldige fragmente toe. Die Gibson-samestellingsmetode, wat 'n kombinasie van veelvuldige gereedskap-ensieme gebruik, maak naatlose afbinding moontlik met fragmentgroottes wat 'n paar honderd kb bereik. Die gestandaardiseerde ontwerp van DNA-komponente verhoog die benuttingstempo van bestaande fragmente.

In vivo monteer tegnieke

Alhoewel vitro saamgestelde fragmente 'n paar honderd kb groot kan bereik, is die opbrengs dikwels onvoldoende, wat amplifikasie met behulp van organismes soos Escherichia coli. In die samestelling van fragmente wat 20 kb oorskry, word rekombinante sisteme binne organismes dikwels gebruik, insluitend Bacillus subtilis, gis en gemanipuleerde bakterieë. Gis, as 'n algemeen gebruikte gasheer, is erken vir sy doeltreffende homoloë rekombinasie vermoë vir baie jare. Dit kan gebruik word om kunsmatige chromosome tot 'n paar megabasisse (Mb) lank saam te stel. Daarbenewens toon Saccharomyces cerevisiae 'n buitengewone toleransie vir chromosoomlengte, wat 'n teoretiese basis bied vir die gebruik van gis om ultra-lang chromosome in hoër organismes te konstrueer.

aansoeke

Yaohai Bio-Pharma gebruik hoofsaaklik twee samestellingsmetodes vir geensintese: ligasesamestelling en DNA-polimerasesamestelling. Die ligase-samestellingsmetode verbind oorvleuelende en gehibridiseerde 5'-gefosforileerde oligonukleotiedfragmente in dubbelstring-DNS deur gebruik te maak van DNA-ligase. Die polimerase-samestellingsmetode gebruik DNA-polimerase om die oorvleuelende oligonukleotiedfragmente uit te brei deur hibridisasie, die verkryging van 'n mengsel van verskillende lengtes, en uiteindelik die suksesvol saamgestelde vollengte fragmente met behulp van primers te versterk. Yaohai's kan kliënte help om aan spesifieke vereistes in geensintese te voldoen.

Ons is ook aktief op soek na institusionele of individuele globale vennote. Ons bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, voel asseblief vry om ons te kontak: [email protected]