Die Mag van die Fed-batch Fermentasie Strategie Benut

Pichia pastoris word wydverspreid gebruik in die vervaardiging van verskeie heterologiese proteïene. Die Hoë-Selldensiteit-Fermentasie (HSDF) tegnologie, geïmplementeer deur Fed-Batch voeding, het suksesvol groot-skaal produksie van biowegwatery en industriële ensieme bereik. In noukeurig beheerde media kan die gebruik van HSDF-tegnologie hoë-opbrengste, hoë-aktiwiteit en koste-effektiewe rekombynant proteïene oplewer.

Onlangse navorsing dui daarop dat deur HSDF-strategieë pogings gedoen word om die produksie en aktiwiteit van heterologiese proteïene in Pichia pastoris te verhoog. HSDF-tegnologie maak dit moeiteloos om hoë vlakke van selgroepings in gedefinieerde media te bereik, waardoor rykdomlike rekombynant proteïene met verbeterde aktiwiteit en verminderde koste deur HSDF verkry kan word. Alhoewel, die keuse van die toepaslike HSDF-strategie om die hoë-vlak uitdrukking van spesifieke proteïene in Pichia pastoris te optimaliseer, steeds 'n uitdaging is.

Hoë-Selldensiteit-Fermentasie (HSDF)

Pichia pastoris presteer uitstekend in heterologiese proteïenproduksie, gunstig vir HCDF in outomatiseerde bioreaktors. HCDF het 3 fases: glicerolbatch, voeding en metanolindusie. Yaohai Bio-Pharma het meer as 'n dekade ervaring in mikrobiële fermerasie en het reeds meer as 400 projekte gedien. Die maatskappy besit wyse kennis en goed ontwikkelde tegnologie, wat dit in staat stel om verskeie HCDF-strategieë te gebruik om die doeltreffendheid van proteïenproduksie te verbeter.

Metanol dien as sowel 'n inducer van AOX1 as 'n koolstofbron, maar sy konentrasie moet beheer word om toksisiteit te voorkom. Die evalueer van verskillende metanolvoedingsstrategieë is krities vir die optimering van die groei van Pichia pastoris en proteïenexpressie.

Metanolindusiestrategie

In die fed-batch HCDF metanol induksie strategie, omvatter staatgebasseerde induksie strategieë 'n versameling beheermetodologieë wat die aanvullende toediening van metanol deur online/offline of voorwaartse/terugwaartse beheer reguleer. Onder die statistiese induksie strategieë sluit die hoofsaaklike μ-stat, Dissolved Oxygen (DO)-stat, metanol-stat en biomass-stat in.

1.1 μ-stat

μ-stat-strategie hou biomass stadig deur μ te beheer, wat reproduksie ondersteun en μ se invloed op proteïen-ekspressie bestudeer. Dit het egter geen direkte metanol- of DO-beheer nie, wat risiko's van akkumulasie en ROS-generasie bring.

1.2 DO-stat

Die DO-stat-strategie beheer die metanolvoer indirect deur die opgeloste suurstof te kontroleer om suurstofvoorsiening te handhaaf, maar dit stel die metanolkonsentrasie en groeitempo nie vas nie, wat die studie van proteïnekspressie kan beïnvloed. Suurstofvoorsiening stel 'n uitdaging vir aerobe fermertasie, en hoewel die aanvulling van suiwer suurstof kostelik en toxisiek kan wees, is drukverhoging 'n meer ekonomiese benadering wat ook proteïnaktiwiteit kan verbeter.

1.3 Metanol-stat

Onvoldoende beheer van die metanolkonsentrasie stel beperkings aan beide μ-stat- en DO-stat-strategieë. Metanol-statistieke strategieë, wat in 'n aan/af-modus opereer, is geneig tot fluktuasies en ontbreek presisie. Daarenteen bied PID-beheerders 'n presisiër regulering van die metanolkonsentrasie, wat die algehele fermertasie-effektiwiteit verhoog.

1.4 Biomassa-stat

Die biomass-stat strategie bepaal die verhouding tussen biomassa en metanolvoeding, deur die metanolvoeringskoers te optimaliseer om die proteïenopbrengs te verbeter. Aanlyn toevertrou van biomassa is meer prakties, met vloei-sitometrie as die voorkeurmetode. By 'n skaal van 1000L, verbeter die optimalisering van die metanolvoeringskoers beduidend die ensiemaktiwiteit, opbrengs en produktiwiteit, wat beter vaar as flasfermentasie.

Gemeenskaplike voedingsstrategie

Glicerol, as 'n AOX1 promotorremmer, moet volkome verbruik word voordat metanolinduksie plaasvind om proteïenproduksie nie te onderdruk nie. Gemeenskaplike substrate kan ensiemaktiwiteit verhoog, maar oormatige glicerol kan groei en uitdruing skade. Sorbitol, askorbynsuur, mannitol en ander kan glicerol vervang, waarmee proteolise en kweektyd verminder word en proteïenuitdruing verbeter.

Die stambank vereis die aanneming van geskikte bewaarmetodes en plaasings in 'n geskikte omgewing om die stabiliteit van stamkenmerke te handhaaf. Yaohai Bio-Pharma kan die vereistes vir glyserolstokbewaring (deur ultra-laagtemperatuurkoelkaste of vloeistofstikstof) en droogvriesbewaring van heuning en E. coli vervul.

Beperkingsgeïnduceerde strategie

In Pichia pastoris verhoog beperkende toestande soos lae DO, metanolkonentrasie, en suurstofbeperking die uitdrukking van rekombinante proteïene. Suurstofbeperkte toestande aktiveer die AOX1-promotor deur metanolopstou, wat die proteïenuitset verhoog terwyl warmte verminder word. Lae-temperatuurindusie verhoog opbrengs, aktiwiteit, stabiliteit en sellewendigheid, maar voeg koëlskoste by. pH en stikstofbeperking ondersteun ook uitdrukking, met die voorbehoud dat daarvoor met oorsig behandel moet word om bedryfsprobleme te vermy. Stikstofbeperking verbeter spesifieke proteïenproduksie merklik.

Yaohai Bio-Pharma soek ook aktief globale instellings- of individuele partners en bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, aarzel asb nie om met ons in kontak te kom: [email protected]