Benut die krag van Fed-batch fermentasiestrategie

Pichia pastoris word wyd gebruik in die produksie van verskeie heteroloë proteïene. Die hoë-sel-digtheid fermentasie (HCDF) tegnologie, geïmplementeer deur Fed-Batch voeding, het suksesvol grootskaalse produksie van biofarmaseutiese middels en industriële ensieme behaal. In presies beheerde media kan die gebruik van HCDF-tegnologie hoë-opbrengs, hoë-aktiwiteit en koste-effektiewe rekombinante proteïene verkry.

Onlangse navorsing dui daarop dat deur middel van HCDF-strategieë, pogings aangewend word om die produksie en aktiwiteit van heteroloë proteïene in Pichia pastoris te verhoog. HCDF-tegnologie maak voorsiening vir die moeitelose bereiking van hoëvlak-selklusters in gedefinieerde media, waardeur die verkryging van oorvloedige rekombinante proteïene met verhoogde aktiwiteit en verlaagde koste deur HCDF moontlik gemaak word. Die keuse van die toepaslike HCDF-strategie om die hoëvlak-uitdrukking van spesifieke proteïene in Pichia pastoris te optimaliseer, bly egter 'n uitdaging.

Hoë-sel-digtheid fermentasie (HCDF)

Pichia pastoris blink uit in heteroloë proteïenproduksie, bevoordeel vir HCDF in outomatiese bioreaktore. HCDF het 3 stadiums: gliserol bondel, voeding en metanol induksie. Yaohai Bio-Pharma spog met meer as 'n dekade se ondervinding in mikrobiese fermentasie en het meer as 400 projekte gedien. Die maatskappy beskik oor uitgebreide kundigheid en goed ontwikkelde tegnologie, wat hom in staat stel om verskeie HCDF-strategieë te gebruik om die doeltreffendheid van proteïenproduksie te verbeter.

Metanol dien as beide 'n induseerder van AOX1 en 'n koolstofbron, maar die konsentrasie daarvan moet beheer word om toksisiteit te voorkom. Die evaluering van verskillende metanolvoedingstrategieë is noodsaaklik vir die optimalisering van die groei van Pichia pastoris en proteïenuitdrukking

Metanol induksie strategie

In die fed-batch HCDF-metanol-induksiestrategie, omvat staatsgebaseerde induksiestrategieë 'n stel beheermetodologieë wat die aanvullende byvoeging van metanol deur aanlyn/aflyn of vorentoe/omgekeerde beheer reguleer. Onder die statistiese induksiestrategieë sluit die belangrikstes μ-stat, opgeloste suurstof (DO)-stat, metanol-stat en biomassa-stat in.

1.1 μ-stat

μ-stat strategie hou biomassa bestendig deur μ te beheer, reproduceerbaarheid te help en μ se effek op proteïen uitdrukking te bestudeer. Dit het egter nie direkte metanol- en DO-beheer nie, wat akkumulasie en ROS-generering in gevaar stel.

1.2 DO-stat

Die DO-stat strategie reguleer indirek die metanolvoer deur die opgeloste suurstof te beheer om oksigenasie te handhaaf, maar dit stel nie die metanolkonsentrasie en groeitempo vas nie, wat die studie van proteïenuitdrukking kan beïnvloed. Suurstof maak 'n uitdaging in aërobiese fermentasie, en hoewel die aanvulling van suiwer suurstof duur en giftig kan wees, is drukverhoging 'n meer ekonomiese benadering wat ook proteïenaktiwiteit kan verbeter.

1.3 Metanol-stat

Onvoldoende beheer van metanolkonsentrasie stel beperkings op beide μ-stat en DO-stat strategieë. Metanol statistiese strategieë, wat in 'n aan/af-modus werk, is geneig tot fluktuasies en het nie akkuraatheid nie. Daarteenoor bied PID-beheerders 'n meer presiese regulering van metanolkonsentrasie, wat die algehele fermentasie-effektiwiteit verbeter.

1.4 Biomassa-statistiek

Die biomassa-statstrategie definieer die verhouding tussen biomassa en metanolvoeding, en optimaliseer die metanolvoedingstempo om proteïenopbrengs te verbeter. Aanlyn monitering van biomassa is meer prakties, met vloeisitometrie die voorkeurmetode. Op 'n 1000L-skaal verbeter die optimering van die metanolvoedingstempo ensiemaktiwiteit, opbrengs en produktiwiteit aansienlik, wat beter as flesfermentasie presteer.

Saamvoedingstrategie

Glycerol, as 'n AOX1-promotor-inhibeerder, moet ten volle verteer word voor metanol-induksie om te verhoed dat proteïenproduksie onderdruk word. Ko-substrate kan ensiemaktiwiteit verbeter, maar oormaat gliserol kan groei en uitdrukking benadeel. Sorbitol, askorbiensuur, mannitol en ander kan gliserol vervang, wat proteolise en verbouingstyd verminder en proteïenuitdrukking verbeter.

Die stambank noodsaak die aanneming van geskikte preserveringsmetodes en plasing in 'n geskikte omgewing om die stabiliteit van vervormingeienskappe te handhaaf. Yaohai Bio-Pharma kan voldoen aan die vereistes vir bewaring van gliserolvoorraad (via ultra-lae temperatuur vrieskaste of vloeibare stikstof) en vriesdroog bewaring van gis en E. coli.

Beperking-geïnduseerde strategie

In Pichia pastoris versterk beperkende toestande soos lae DO, metanolkonsentrasie en suurstoflimiet rekombinante proteïenuitdrukking. Suurstofbeperkte toestande aktiveer AOX1-promotor via metanol-akkumulasie, wat proteïenuitset verhoog terwyl hitte verminder word. Lae-temp induksie verhoog opbrengs, aktiwiteit, stabiliteit en sel lewensvatbaarheid, maar voeg verkoelingskoste by. pH- en stikstofbeperking help ook uitdrukking, wat versigtigheid vereis om operasionele probleme te vermy. Stikstofbeperking verhoog veral spesifieke proteïenproduktiwiteit.

Yaohai Bio-Pharma is ook aktief op soek na institusionele of individuele globale vennote en bied die mees mededingende vergoeding in die bedryf. As jy enige vrae het, voel asseblief vry om ons te kontak: [email protected]