Yüksek Kaliteli Plazmid Çıkarmadaki Gizemleri Açığa Çıkarma

Plazmid çıkarma araştırmacılar için kritik öneme sahiptir. Gen vektörleri olarak plazmlar, aşı araştırması ve gen terapisi gibi alanlarda kalite açısından önemli olan süreçlerde kullanılır. Ana kalite faktörleri superkatlanma oranı ve endotoksin içeriğidir. Yönetmelikler değişkenlik gösterir: FDA ≥80%, SMPA ≥85%, NMPA ≥90%, lineer/açık daireli DNA oranları ise %5'ten azdır. Müşteriler genellikle ≥95% superkatlanmış plazmı tercih eder. Endotoksin seviyeleri şu şekildedir: araştırma (>50 EU/µg), transfeksiyon (<50 EU/µg) ve endotoksin-özgür (<0.1 EU/µg).

Superkatlanmış Plazmid DNA

Escherichia coli'den elde edilen plazmlar, superkatlanmış (SC), açık-daireli (OC) ve lineer (L) DNA'ları içerir. Yüksek SC oranı transfeksiyon verimliliğini ve ifadeyi artırır. Örneğin, %85.45 SC oranına sahip bir plazmin transfeksiyon oranı 2.5 kat daha yüksektir ve %93.28 SC oranına sahip bir plazmin HGF ifadesi 1.8 kat daha yüksektir; bu da SC DNA'nın üstünlüğünü doğrular.

Açık-daireli DNA: Çift sarmallı DNA'nın bir zinciri kırıldığında, süper sarılı yapı gevşer ve daha büyük bir hacime sahip, elektroforoze en yavaş göç eden açık-daireli plazmid oluşturur ve en üstte yer alır.

Doğrusal DNA: Plazmit DNA'nın her iki zinciri de kırıldığında, nispeten daha küçük bir hacme sahip doğrusal bir yapı oluşur; bu yapı açık-daireli DNA'dan daha hızlı ancak süper sarılı DNA'dan daha yavaş göç eder ve ikinci sırada yer alır.

Süper sarılı DNA: İki helyeks birbirine dolanır ve DNA helyeksi üzerine süper sarılı bir yapı oluşturur. En küçük hacime sahiptir ve elektroforoz sırasında en hızlı göç eder, en altta yer alır.

Süper Sarılı Oranının Kuantitatif Analizi

Laboratuvarlar, süper sarılı oranını elektroforoz görüntülerinden yoluyla AGK (agaroz jel elektroforozu) ve Gel-Pro Analyzer kullanarak değerlendirir. Bir görüntüde %97,539 SC DNA gösterilirken, başka bir görüntüde %63,833 SC ve %36,167 OC DNA (doğrusal DNA görünmez) gösterilmektedir.

Plazmitlerde Endotoksinin Sırrı

Endotoxin, Gram-egatif bakterilerin hücre duvarının dış katmanının bir bileşeni olup, bakteri ölümünden veya lisizden sonra salgılanır ve toksik lipopolisakkarit A içerir. Plazmid çıkarma sırasında, endotozin lizis çözeltisine girdiği görülmektedir; bu da transfeksiyon verimliliğini etkileyebilir ve spesifik olmayan immün yanıtlarını tetikleyerek deneylerde yanlış pozitif sonuçlara neden olabilir.

Endotoxin'in Kuantitatif ve Kalitatif Analizi

Limulus amebosit lizatı (LAL) testi, lipopolisakkarit (LPS) içindeki 2-keto-3-deoksisektozotonsik asit (KDO) ile aglutinasyon yoluyla endotoxinin varlığını tespit eder. Bu yöntem kalitatiftir ve yarı-kvantitatiftir; örneklere karıştırıldığında koagülasyon veya renk değişimiyle endotoxin varlığını gösterir.

Yaohai Bio-Pharma, endotoxin içermeyen süperkatmanlı plazmlar sunmaktadır. Yaohai'ye harici hizmet alma, transfeksiyon ve ifade verimliliğini artırır. Teslim edilen plazmların %95'inden fazlasının SC oranıdır (ortalama %85±10%) ve endotoxin seviyeleri ≤0.1, ≤0.01 veya ≤0.005 EU/μg'dür.

Ayrıca, kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arayışındayız. Endüstride en rekabetçi müsadereyi sunuyoruz. Herhangi bir sorunuz varsa, lütfen bizimle iletişime geçmeyi çekinmeyin: [email protected]