Yüksek Kaliteli Plazmit Çıkarımının Sırlarını Açığa Çıkarmak

Plazmit ekstraksiyonu araştırmacılar için hayati önem taşır. Gen vektörleri olarak plazmitler, kalitenin önemli olduğu aşı araştırmaları ve gen terapisinde hayati önem taşır. Temel kalite faktörleri arasında süper sarmal oran ve endotoksin içeriği bulunur. Düzenlemeler değişir: FDA ≥%80, SMPA ≥%85, NMPA ≥%90, <%5 doğrusal/açık dairesel DNA ile. Müşteriler genellikle ≥%95 süper sarmal tercih eder. Endotoksin seviyeleri şunlardır: araştırma (>50 EU/µg), transfeksiyon (<50 EU/µg) ve endotoksinsiz (<0.1 EU/µg).

Süper Sarmal Plazmit DNA

Escherichia coli'den plazmidler arasında süper sarmal (SC), açık dairesel (OC) ve doğrusal (L) DNA bulunur. Yüksek SC oranı transfeksiyon verimliliğini ve ifadesini artırır. Örneğin, %85.45'lik bir SC plazmidinin transfeksiyonu 2.5 kat daha yüksektir ve %93.28'lik bir SC plazmidinin HGF ifadesi 1.8 kat daha yüksektir ve bu da SC DNA'sının üstünlüğünü doğrular.

Açık dairesel DNA: Çift sarmallı DNA'nın bir ipliği koptuğunda, süper sarmal yapı gevşer ve elektroforez sırasında en yavaş hareket eden ve en üstte konumlanan, daha büyük hacimli, açık dairesel bir plazmid oluşur.

Doğrusal DNA: Plazmit DNA'nın her iki zinciri kırıldığında, açık dairesel DNA'dan daha hızlı, süper sarmal DNA'dan ise daha yavaş göç eden, nispeten daha küçük hacimli doğrusal bir yapı oluşur ve ikinci sırada yer alır.

Süper sarmal DNA: İki sarmal, DNA sarmalına dayalı süper sarmal bir yapıya dönüşerek iç içe geçer. En küçük hacme sahiptir ve elektroforez sırasında en hızlı göç eden yapıdır, altta yer alır.

Süper Sarmal Oranının Kantitatif Analizi

Laboratuvarlar, elektroforez görüntüleri aracılığıyla süper sarmal oranını değerlendirmek için agaroz jel elektroforezi (AGE) ve Gel-Pro Analizörü kullanır. Bir görüntü %97.539 SC DNA gösterirken, bir diğeri %63.833 SC ve %36.167 OC DNA gösterir (doğrusal DNA görünmez).

Plazmidlerdeki Endotoksin Sırrı

Endotoksin, Gram negatif bakterilerin hücre duvarının dış tabakasının bir bileşeni olup, bakteriyel ölüm veya lizis sonrasında salınır ve toksik lipopolisakkarit A içerir. Plazmit ekstraksiyonu sırasında endotoksin lizis çözeltisine girerek transfeksiyon etkinliğini etkiler ve nonspesifik bağışıklık tepkilerini tetikler; bu da deneylerde yanlış pozitif sonuçlara yol açar.

Endotoksinin Kantitatif ve Nitel Analizi

Limulus amebosit lizat (LAL) testi, lipopolisakkaritte (LPS) 2-keto-3-deoksioktonik asit (KDO) ile aglütinasyon yoluyla endotoksini tespit eder. Kalitatif ve yarı kantitatiftir ve örneklerle karıştırıldığında pıhtılaşma veya renk değişimi yoluyla endotoksinin varlığını gösterir.

Yaohai Bio-Pharma endotoksin içermeyen süper sarmallı plazmidler sunar. Yaohai'ye dış kaynak kullanımı transfeksiyon ve ifade verimliliğini artırır. Verilen plazmidlerin ≥%95 SC oranı (ort. %85±10) ve endotoksin seviyeleri ≤0.1, ≤0.01 veya ≤0.005 EU/μg'dır.

Ayrıca aktif olarak kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arıyoruz. Sektördeki en rekabetçi tazminatı sunuyoruz. Herhangi bir sorunuz varsa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin: [email protected]