Yeniden Bütünleşik Protein Üretimi: Mühendislik Yapılmış E. coli Ştripleri

Escherichia coli (E. coli), biyofarmasektöründe rekombinant proteinlerin üretiminde önemli bir rol oynamıştır ve biyolojik ilaç üretimi için ilk ifade vektörü olmuştur. E. coli hızlı büyüme, kolay genetik manipülasyon ve rekombinant proteinlerin hızlı sentezi gibi avantajlara sahiptir. Geniş kapsamlı değişikliklerle E. coli, protein ifadesi için en iyi seçim hâline gelmiştir ve bu da çeşitli mühendislikli E. coli ştrolarının tasarlanmasıyla sonuçlanmıştır.

Yaohai Bio-Pharma, E. coli ifade sistemleri kullanılarak bir dizi biyofarmasötik ürün için fermantasyon, temizleme, formülasyon süreç geliştirmesi ve üretim hizmetlerinde tek adresli dışarıya aktarma hizmetleri sunmaya odaklanmaktadır. Yaohai'nin geniş deneyimi ışığında, rekombinant protein üretiminde kullanılan dört yaygın E. coli ştroları ve özelliklerini özetledik.

BL 21 ştrolu

E. coli B soyundan türetilmiş olan BL21 ștrifi, Lon proteazını ve dış membran proteazı OmpT'yi içermemektedir. Lon proteazı esas olarak dış kaynaklı proteinleri bozarken, OmpT ise çoğunlukla ekstrasel matris proteinlerini bozar. Bu iki ana proteazın yokluğu, rekombinant proteinlerin bozulmasını etkili bir şekilde önleyebilir.

Origami ștrifi

Origami ștrifi, E. coli K-12'nin bir türevidir ve tiorokin reductase ve glutation reductase'de mutasyonlara sahiptir; bu da disülfür bağı içeren proteinlerin doğru şekilde katlanmasını sağlar ve protein çözünürlüğünü artırır. Origami ștrifi, Origami, Origami 2 ve Origami B dahil olmak üzere, disülfür bağı içeren aktif proteinlerin ifadesi için uygunlardır.

SHuffle ștrifi

SHuffle șıkkı, sianoplazmada disülfid bağı izomeraz DsbC'nin sürekli ifadesini içerir ki bu da oksidize edilmiş proteinlerde doğru disülfid bağlarının oluşmasını teşvik eder. Ayrıca, protein katlanması için moleküler bir yardımcı madde olarak görev yapar ve doğru konformasyonun oluşmasına yardımcı olur.

Rosetta şıkkı

Rosetta şıkkı, özellikle eukaryotik genler gibi dış kaynaklı genlerin prokaryotik sistemlerdeki ifadesini artırmayı amaçlayan nadir kodonlara karşılık gelen tRNA'ları E. coli'ye ekler. BL21'den türetilmiş ve kloramfenikol dirençli pRARE plazmiğini taşıyan bu şık, orijinal olarak E. coli'de bulunmayan altı nadir kodona (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC ve GGA) karşılık gelen tRNA'ları sağlar, böylece daha "evrensel" bir protein ifadesi sunar.

Sonuç

Başarılı rekombinant protein üretimindeki üç ana faktör, evsahibi, vektör ve kültür koşullarıdır. Rekombinant proteinin fizikokimyasal özelliklerinin, her bir ırkıın benzersiz avantajlarının ve deneyin özel gereksinimlerinin anlaşılmasıyla en uygun evsahibi seçilmelidir. Ayrıca, plazmid vektörleri, sıcaklık ve tetikleyiciler gibi faktörler optimize edilerek protein ifadesi artırılmalıdır.

Yaohai Bio-Pharma aynı zamanda kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arayışındadır ve endüstryede en rekabetçi ödülleri sunmaktadır. Herhangi bir sorunuz varsa, lütfen bizimle iletişime geçmeyi çekinmeyin: [email protected]