Rekombinant Protein Üretimi: Mühendislikle Üretilen E. coli Suşları

Escherichia coli (E. coli), biyofarmasötik endüstrisinde rekombinant proteinler üretmede önemli bir rol oynamış ve biyolojik ilaç üretimi için ilk ifade vektörü olarak hizmet etmiştir. E. coli, diğer avantajlarının yanı sıra hızlı büyüme, uygun genetik manipülasyon ve rekombinant proteinlerin hızlı sentezine sahiptir. Kapsamlı değişiklikler, E. coli'yi protein ifadesi için en uygun seçim haline getirmiş ve çeşitli E. coli mühendislik türlerinin tasarlanmasına yol açmıştır.

Yaohai Bio-Pharma, E. coli ekspresyon sistemleri kullanılarak bir dizi biyofarmasötiğin fermantasyonu, saflaştırılması, formülasyon süreci geliştirme ve üretimi için tek elden dış kaynak hizmetleri sağlama konusunda uzmanlaşmıştır. Yaohai'nin kapsamlı deneyimiyle ilgili olarak, rekombinant protein üretimi için dört yaygın E. coli suşunun kullanıldığını ve özelliklerini özetledik.

BL 21 suşu

E. coli B soyundan türetilen BL21 suşu, Lon proteazı ve dış zar proteazı OmpT'den yoksundur. Lon proteazı öncelikli olarak ekzojen proteinleri parçalarken, OmpT öncelikli olarak hücre dışı matris proteinlerini parçalar. Bu iki önemli proteazın yokluğu, rekombinant proteinlerin parçalanmasını etkili bir şekilde önleyebilir.

Origami suşu

E. coli K-12'nin bir türevi olan Origami suşu, disülfür bağları içeren doğru katlanmış proteinlerin oluşumunu kolaylaştıran ve protein çözünürlüğünü artıran tiyoredoksin redüktaz ve glutatyon redüktazda mutasyonlara sahiptir. Origami, Origami 2 ve Origami B'yi içeren Origami suşu, disülfür bağları içeren aktif proteinlerin ekspresyonu için uygundur.

SHuffle suşu

SHuffle suşu, sitoplazmada disülfür bağı izomeraz DsbC'yi sürekli olarak ifade ederek oksitlenmiş proteinlerde doğru disülfür bağlarının oluşumunu destekler. Ayrıca protein katlanması için moleküler bir şaperon görevi görerek doğru konformasyonun oluşumuna yardımcı olur.

Rosetta suşu

Rosetta suşu, E. coli'yi nadir kodonlara karşılık gelen tRNA'larla destekleyerek, prokaryotik sistemlerde özellikle ökaryotik genler olmak üzere ekzojen genlerin ifade düzeyini iyileştirmeyi amaçlar. BL21'den türetilen ve kloramfenikol dirençli pRARE plazmidini taşıyan bu suş, E. coli'de başlangıçta bulunmayan nadir kodonlara (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC ve GGA) karşılık gelen altı tRNA'yı destekleyerek daha "evrensel" bir protein ifadesi sağlar.

Sonuç

Rekombinant proteinlerin başarılı üretimi için üç ana faktör konak, vektör ve kültür koşullarıdır. Rekombinant proteinin fizikokimyasal özelliklerinin anlaşılması, her suşun benzersiz avantajları ve deneyin özel ihtiyaçları temelinde en uygun konak seçilmelidir. Ek olarak, plazmid vektörleri, sıcaklık ve indükleyiciler gibi faktörler protein ekspresyonunu artırmak için optimize edilmelidir.

Yaohai Bio-Pharma ayrıca aktif olarak kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arıyor ve sektördeki en rekabetçi tazminatı sunuyor. Herhangi bir sorunuz varsa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin: [email protected]