EGFP mRNA Üretim Süreci

EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) mRNA üretimine, işlevsel bir RNA molekülü oluşturmak için bir dizi moleküler biyoloji tekniği dahildir ki bu molekül eGFP'nin ifadesini kodlar. eGFP mRNA alanında Yaohai Bio-Pharma, müşterilerin özel ihtiyaçlarına uygun çözümler sunmak için geniş deneyim kazandı. Deneyimlerimizi kullanarak EGFP mRNA üretim sürecini sentezledik.

1. EGFP Genini Kopyalama : eGFP'yi kodlayan gen dizisini elde etmek için bu gen tipik olarak önceden var olan bir plazmid vektöründen kopyalanır veya bilinen nükleotid dizisi temelinde yapay olarak sentezlenir. Klonlanmış gen, doğruluğunu sağlamak için dizilerek doğrulanır.
2. İfade İçin Gen Optimizasyonu : Hedef sistemde (örneğin, memeli hücreleri, bakteriler veya in vitro transkripsiyon sistemleri) en iyi ifade için eGFP geni kodon optimizasyonu geçebilir. Bu, orijinal dizideki nadir kodonları, konak organizmada daha sık kullanılan kodonlarla değiştirerek, verimli bir çeviri olasılığını artırmayı içerir.
3. İn vitro Transkripsiyon Şablonu Hazırlama : Optimizasyonu tamamlanmış gen hazır hale gelirse, sıklıkla bir promotor dizisi gibi transkripsiyon için gerekli düzenleyici elemanları içeren uygun bir vektör, genellikle bir plazmito yerleştirilir. Bu plazmit, in vitro transkripsiyon için bir şablon olarak hizmet eder.
4. İn vitro Transkripsiyon : Hazırlanmış plazmit şablonu kullanılarak, vitro transkripsiyon işlemi eGFP mRNA sentezi için gerçekleştirilir. Bu süreç, promotor dizisini tanıyarak transkripsiyonu başlatan RNA polimeraz enzimlerinin kullanılmasını içerir ve DNA şablonuna karşılık gelen bir RNA zinciri üretir. İstenen uygulamaya bağlı olarak, mRNA kapatılabilir, poliadilenlenebilir ve/veya kararlılığı ve çeviri verimliliğini artırmak için değiştirilebilir.
5. Ayrıştırma ve Kalite Kontrolü : Sentez edilen eGFP mRNA, DNA, proteinler ve serbest nükleotitler gibi kirliliklerden arındırılmak üzere ayrıştırılır. Ayrıştırma yöntemleri, jel elektroforezi, sütun kromatografisi veya küre tabanlı ayırıcı teknikler içerebilir. Ayrıştırma sonrası, mRNA, UV-Vis spektrofotometri ve jel elektroforezi gibi tekniklerle konsantrasyon, saflik ve bütünlük açısından analiz edilir.
6. Depolama ve Teslimat : Temizlenen eGFP mRNA genellikle kararlılığı korumak için düşük sıcaklıklarda depolanır. Deneysel kullanım için, mRNA'nin hücrelere teslimi, uygulama ve hedef hücre türüne bağlı olarak elektroporasyon, lipojeksiyon veya virüs vektörleri gibi çeşitli yöntemlerle yapılabilir.
7. İfade ve Doğrulama : Hücre içine girdikten sonra, eGFP mRNA, floresans mikroskobisi kullanılarak görülebilen artırılmış yeşil floresan protein (eGFP) olarak çevrilir. Bu, başarılı mRNA üretimini, teslimini ve ifadesini doğrulamayı sağlar.

Özetle, eGFP mRNA'sının üretimi, genin klonlanması, ifade için optimize edilmesi, bir in vitro transkripsiyon şablonu hazırlaması, transkripsiyon reaksiyonunun yapılması, elde edilen mRNA'nın temizlenmesi ve son olarak ifade ve doğrulama için hücrelere teslim edilmesi içerir.

Ayrıca, kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arayışındayız. Endüstride en rekabetçi müsadereyi sunuyoruz. Herhangi bir sorunuz varsa, lütfen bizimle iletişime geçmeyi çekinmeyin: [email protected]