eGFP mRNA Üretim Süreci

eGFP (Geliştirilmiş Yeşil Floresan Protein) mRNA üretimi, eGFP'nin ifadesini kodlayan işlevsel bir RNA molekülü üretmek için bir dizi moleküler biyoloji tekniğini içerir. eGFP mRNA alanında, Yaohai Bio-Pharma müşterilerin özel ihtiyaçlarını karşılama konusunda kapsamlı deneyim biriktirmiştir. Deneyimimizi kullanarak, EGFP mRNA üretimi için süreç akışını sentezledik.

1. eGFP Geninin Klonlanması: eGFP'yi kodlayan gen dizisini elde etmek için. Bu gen tipik olarak önceden var olan bir plazmit vektöründen klonlanır veya bilinen nükleotid dizisine dayanarak yapay olarak sentezlenir. Klonlanan gen daha sonra doğruluğu sağlamak için dizileme yoluyla doğrulanır.
2. İfade için Gen Optimizasyonu: Hedef sistemde (örneğin, memeli hücreleri, bakteriler veya in vitro transkripsiyon sistemleri) optimum ifade için, eGFP geni kodon optimizasyonuna uğrayabilir. Bu, orijinal dizideki nadir kodonların konak organizmada daha sık kullanılanlarla değiştirilmesini içerir ve verimli çeviri şansını artırır.
3. In vitro Transkript Şablonu Hazırlama: Optimize edilmiş gen hazır olduğunda, genellikle transkripsiyon için gerekli düzenleyici elementleri (örneğin, bir promotör dizisi) içeren uygun bir vektöre, genellikle bir plazmite dahil edilir. Bu plazmid, in vitro transkripsiyon için bir şablon görevi görür.
4. In vitro Transkripsiyon: Hazırlanan plazmit şablonu kullanılarak, eGFP mRNA'sını sentezlemek için in vitro transkripsiyon gerçekleştirilir. Bu işlem, promotör dizisini tanıyan ve transkripsiyonu başlatan, DNA şablonuna tamamlayıcı bir RNA ipliği üreten RNA polimeraz enzimlerinin kullanımını içerir. İstenilen uygulamaya bağlı olarak, mRNA stabilite ve çeviri verimliliğini artırmak için kapatılabilir, poliadenile edilebilir ve/veya modifiye edilebilir.
5. Saflaştırma ve Kalite Kontrol: Sentezlenen eGFP mRNA daha sonra DNA, proteinler ve serbest nükleotidler dahil olmak üzere tüm kirleticileri gidermek için saflaştırılır. Saflaştırma yöntemleri jel elektroforezi, kolon kromatografisi veya boncuk bazlı ayırmayı içerebilir. Saflaştırmanın ardından mRNA, UV-Vis spektrofotometrisi ve jel elektroforezi gibi teknikler kullanılarak konsantrasyon, saflık ve bütünlük dahil olmak üzere kalite açısından analiz edilir.
6. Saklama ve Teslimat: Saflaştırılmış eGFP mRNA, stabiliteyi korumak için genellikle düşük sıcaklıklarda saklanır. Deneysel kullanım için mRNA, belirli uygulamaya ve hedef hücre tipine bağlı olarak elektroporasyon, lipofeksiyon veya viral vektörler dahil olmak üzere çeşitli yöntemler kullanılarak hücrelere iletilebilir.
7. İfade ve Doğrulama: Hücrenin içine girdiğinde, eGFP mRNA, floresan mikroskobu kullanılarak görüntülenebilen geliştirilmiş yeşil floresan proteine ​​çevrilir. Bu, başarılı mRNA üretimi, iletimi ve ifadesinin doğrulanmasını sağlar.

Özetle, eGFP mRNA üretimi, genin klonlanmasını, ekspresyon için optimize edilmesini, in vitro transkripsiyon şablonunun hazırlanmasını, transkripsiyon reaksiyonunun gerçekleştirilmesini, elde edilen mRNA'nın saflaştırılmasını ve son olarak ekspresyon ve doğrulama için hücrelere iletilmesini içerir.

Ayrıca aktif olarak kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arıyoruz. Sektördeki en rekabetçi tazminatı sunuyoruz. Herhangi bir sorunuz varsa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin: [email protected]