Büyük Ölçekli Gen Sentezi için Yenilikçi Montaj Teknikleri

Sıfırdan büyük DNA parçalarının sentezlenmesi için birleştirme teknolojisi, BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson birleştirme, CPEC ve Overlap PCR gibi yöntemleri kapsayan gen sentezinin temel taşıdır. Mevcut teknolojinin gen uzunluğundaki DNA'yı tek bir adımda doğru bir şekilde sentezlemedeki sınırlılıkları nedeniyle, segmentler halinde sentezlenen oligonükleotid parçalarını uzun DNA parçalarına birleştirmek için in vitro ve in vivo birleştirme tekniklerini birleştirmek gereklidir.

In vitro montaj teknikleri

Parça boyutu ve dizi özelliklerine göre çeşitli yöntemlere sınıflandırılırlar ve ortak bir araç enzimleri kullanma gereksinimi vardır. DNA polimeraz yöntemine dayanan Overlap PCR, basit ve hızlı çalışır. İzoşizomerlere dayanan BioBrick ve BglBrick yöntemleri, füzyon proteinleri için uygun olmasa da, standartlaştırılmış birleştirmeyi mümkün kılar. Tip IIS restriksiyon enzimlerine dayanan Golden Gate klonlama yöntemi, birden fazla parçanın etkili bir şekilde sorunsuz bir şekilde bağlanmasına olanak tanır. Birden fazla araç enziminin bir kombinasyonunu kullanan Gibson birleştirme yöntemi, birkaç yüz kb'ye ulaşan parça boyutlarında sorunsuz bir şekilde bağlanmayı mümkün kılar. DNA bileşenlerinin standartlaştırılmış tasarımı, mevcut parçaların kullanım oranını artırır.

Canlı organizmada montaj teknikleri

Rağmen in vitro Bir araya getirilen parçalar birkaç yüz kb boyutuna ulaşabilir, verim genellikle yetersizdir ve bu da organizmalar kullanılarak amplifikasyon gerektirir. Escherichia koli. 20 kb'yi aşan parçaları bir araya getirirken, Bacillus subtilis, maya ve tasarlanmış bakteriler de dahil olmak üzere organizmalar içindeki rekombinant sistemler sıklıkla kullanılır. Yaygın olarak kullanılan bir konakçı olan maya, uzun yıllardır verimli homolog rekombinasyon yeteneğiyle tanınmaktadır. Uzunluğu birkaç megabaz (Mb)'a kadar olan yapay kromozomları bir araya getirmek için kullanılabilir. Ek olarak, Saccharomyces cerevisiae kromozom uzunluğuna karşı olağanüstü bir tolerans sergiler ve bu da mayanın daha yüksek organizmalarda ultra uzun kromozomlar oluşturmak için kullanılmasına yönelik teorik bir temel sağlar.

Uygulamalar

Yaohai Bio-Pharma, gen sentezi için temel olarak iki birleştirme yöntemi kullanır: ligaz birleştirme ve DNA polimeraz birleştirme. Ligaz birleştirme yöntemi, örtüşen ve hibridize edilmiş 5'-fosforile edilmiş oligonükleotid parçalarını DNA ligaz kullanarak çift sarmallı DNA'ya bağlar. Polimeraz birleştirme yöntemi, örtüşen oligonükleotid parçalarını hibridizasyon yoluyla uzatmak için DNA polimerazı kullanır, farklı uzunluklarda bir karışım elde eder ve son olarak primerler kullanılarak başarıyla birleştirilen tam uzunluktaki parçaları çoğaltır. Yaohai, müşterilerin gen sentezindeki belirli gereksinimleri karşılamalarına yardımcı olabilir.

Ayrıca aktif olarak kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arıyoruz. Sektördeki en rekabetçi tazminatı sunuyoruz. Herhangi bir sorunuz varsa lütfen bizimle iletişime geçmekten çekinmeyin: [email protected]