Büyüme Ölçeği Gen Sentezi için Yenilikçi Montaj Teknikleri

Sıfırdan büyük DNA parçaları sentezlemek için kullanılan montaj teknolojisi, gen sentezi'nin temel taşıdır ve BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, Gibson montajı, CPEC ve Overlap PCR gibi yöntemleri kapsar. Mevcut teknolojinin tek adımda gen uzunluğundaki DNA'yı doğru bir şekilde sentezlemekteki sınırlamaları nedeniyle, segmentler halinde sentezlenmiş oligonükleotid parçalarını uzun DNA parçalarına dönüştürmek için in vitro ve in vivo montaj tekniklerini birleştirmek gerekir.

In vitro montaj teknikleri

Parça boyutuna ve dizilim özelliklerine göre çeşitli yöntemlere ayrılmışlardır, araç enzimlerin kullanılması için ortak bir gereklilikle. Overlap PCR, DNA polimeraz yöntemi üzerine kurulmuştur ve kullanımı basit ve hızlıdır. BioBrick ve BglBrick yöntemleri, isoschizomerlere dayanarak standartlaştırılmış montajı sağlar, ancak BioBrick yöntemi fuzyon proteinler için uygun değildir. Golden Gate klonlama yöntemi, tip IIS kısıt enzimlerine dayanarak birden fazla parçanın etkili bir şekilde seemless (kesintisiz) ligasyonunu sağlar. Gibson montaj yöntemi, birden fazla araç enzimin kombinasyonunu kullanarak kesintisiz ligasyonu sağlar ve parça boyutları birkaç yüz kb'ya ulaşabilir. DNA bileşenlerinin standartlaştırılmış tasarımı mevcut parçaların kullanım oranını artırır.

İn vivo montaj teknikleri

Ancak i̇n vitro montaj edilen parçalar birkaç yüz kb boyutunda olabilir, ancak verim genellikle yetersizdir ve şu gibi organizmalar kullanılarak amplifikasyona ihtiyaç duyar Escherichia coli. 20 kb'yi geçen fragmentleri birleştirmek için, sıklıkla organizmalar içindeki rekombinant sistemler kullanılır, bunlar arasında Bacillus subtilis, maya ve mühendislik yapılmış bakteriler bulunur. Maya, birçok yıl boyunca etkin homolog rekombinasyon yeteneği nedeniyle yaygın olarak kullanılan bir evsaf olarak tanınır. Yapay kromozomları birkaç megabaz (Mb) uzunluğunda birleştirmek için kullanılabilir. Ayrıca, Saccharomyces cerevisiae kromozom uzunluğuna karşı olağanüstü bir toleransa sahiptir ki bu da yeast'i yüksek organizmalarda ultra-uzun kromozomlar inşa etmek için kullanma teorik temelini oluşturur.

Uygulamalar

Yaohai Bio-Pharma, gen sentezi için esas olarak iki montaj yöntemi kullanır: ligaz montajı ve DNA polimeraz montajı. Ligaz montaj yöntemi, DNA ligazını kullanarak 5'-fosforil edilmiş örtüşen ve hibritleşmiş oligonükleotid parçacıklarını çift telli DNA'ya bağlar. Polimeraz montaj yöntemi ise DNA polimerazını kullanarak örtüşen oligonükleotid parçacıklarını hibritleştirme yoluyla uzatır, farklı uzunluklardaki bir karışım elde eder ve sonunda tam uzunluktaki başarıyla monte edilmiş parçalarıprimerlerle amplifye eder. Yaohai, müşterilerinin gen sentezi konusundaki özel gereksinimlerini karşılamakta yardımcı olabilir.

Ayrıca, kurumsal veya bireysel küresel ortaklar arayışındayız. Endüstride en rekabetçi müsadereyi sunuyoruz. Herhangi bir sorunuz varsa, lütfen bizimle iletişime geçmeyi çekinmeyin: [email protected]