Prilagođena sinteza saRNA
Samoumnožavajući se mRNA (saRNA), takođe poznat kao replicon RNA, kodira sekvence in vitro transkripcije (IVT) mRNA i virske replikaze gene izvedene od alfavirusa ili flavivirusa. Virski gene replikaze omogućavaju samoumnožavanje mRNA, što rezultira povećanom ekspresijom proteina i minimalnom potrebnom dozom RNA u poređenju sa neumnožavajućim mRNAMA. Dodatno, saRNA je relativno veliki molekul (više od 14 kb).
Yaohai Bio-Pharma je osnovao skup tehnologija za sintezu mRNA kako bi pružio neumnožavajuće mRNA i samoumnožavajuće mRNA (1000 nt~14000 nt), poput dizajna i optimizacije sekvenci, IVT-a, čišćenja, liofilizacije i encapsulacije lipidnim nanoparticulama (LNP). Sva proizvodstva se oslobađaju pod strogo kontrolisanim standardima kvaliteta.
Slika 1. Strukturne karakteristike IVT mRNA: Konvencionalna, Krugla i Samoopštavajuća mRNA.
Sekvencijske karakteristike samoopštavajuće mRNA
Samoopštavajući RNA sadrži četiri ne-strukturna proteina (označena kao nsP1, nsP2, nsP3 i nsP4), koji su izvedeni iz alfavirusa, Venezuelskog jonskog encefalitis virusa (VEEV). Među ovim, nsP1 izražava dvostruku enzimsku aktivnost, a to su GTaza i N7MTaza, dok nsP2 poseduje RTPaznu aktivnost, ključnu za zaklapanje IVT mRNA kako bi se generisala Cap 0 struktura. Pored toga, nsP2 služi kao proteaza i helikaza, omogućujući složenu obradu celog nsP kompleksa. Tačna funkcija nsP3 još uvek nije potpuno razumljiva, ali sudjeluje u interakcijama sa različitim proteinićima domaćinice, time prispevajući umanjivanju antivirskog odgovora koje podizanje domaćin.
Podgenomski promotor (SGP) region alfavira nalazi se pre gena od interesa (GOI). SGP element omogućava pokretanje transkripcije GOI, obilazeći čitanje niza koji kodira virske nsP proteine.
Slika 2. Sinteza i celijaski testovi eGFP saRNA platforme Yaohai Bio-Pharma RNASci.
Prilagođena rešenja saRNA
Protokol za sintezu saRNA je sličan mRNA: Prilagođena sinteza mRNA
- Dizajn niza
- Priprema plazmidnog šablon
- transkripcija in vitro (IVT)
- enzimatsko zaklapanje mRNA
- kopiranje mRNA uz odmah pridruživanje kapa
- čišćenje mRNA
- liofilizacija mRNA
- LNP Enkapsulacija
- Аналитика и тестирање
EN
AR
HR
CS
DA
NL
FI
FR
DE
EL
IT
JA
KO
NO
PL
PT
RO
RU
ES
SV
IW
ID
LV
LT
SR
SK
SL
UK
VI
ET
HU
TH
TR
FA
AF
MS
BE
MK
UR
BN
