Výroba rekombinantných bílkovín: Inženiersky upravené štíre E. coli

Escherichia coli (E. coli) zohrala významnú úlohu v produkcií rekombinantných bílkovín v biopharmaceutickom priemysle, slúžiace ako prvá expresná vektor pre výrobu biologického lieku. E. coli má rýchly rast, pohodlnú genetickú manipuláciu a rýchlu syntézu rekombinantných bílkovín medzi inými výhodami. Rozsiahle úpravy urobili E. coli ideálnou voľbou pre expresiu bílkovín, čo viedlo k návrhu rôznych inžinierskych štrienok E. coli.

Yaohai Bio-Pharma sa specializuje na poskytovanie kompletných služieb externalizácie pre fermentáciu, čistenie, formuláciu procesového vývoja a výroby série biopharmaceutik pomocou systémov expresie E. coli. Vzhľadom na rozsiahle skúsenosti Yaohai sme shrnuli, že štyri bežné štiny E. coli sa používajú na produkciu rekombinantných bílkovín a ich vlastnosti.

BL 21 štýn

Odvozená od lináge E. coli B, štréna BL21 nedostupuje proteázu Lon a vonkajšiu membránovú proteázu OmpT. Proteáza Lon predovšetkým degraduje exogénne proteíny, zatiaľ čo OmpT hlavne degraduje proteíny extracelulárnej matice. Absencia týchto dvoch kľúčových proteáz môže účinne zabrániť degradácii rekombinantných proteínov.

Štréna Origami

Štréna Origami, derivát E. coli K-12, má mutácie v reduktáze thioredoxínu a glutatónovej reduktáze, ktoré podporujú tvorbu správne zložených proteínov obsahujúcich disulfidové väzy a zvyšujú rozpustnosť proteínov. Štrény Origami, vrátane Origami, Origami 2 a Origami B, sú vhodné na expresiu aktívnych proteínov obsahujúcich disulfidové väzy.

Štréna SHuffle

Štaml SHuffle konštantne vyjadruje izomer disulfidových väzánok DsbC v cytoplazme, čo podporuje tvorbu správnych disulfidových väzánok v oxidovaných bielecích. Slúži tiež ako molekulárny chaperón pre sčítavanie bielecích, pomáhajúc pri tvorbe správnej konformácie.

Štaml Rosetta

Štaml Rosetta dopĺňa E. coli tRNA odpovedajúce retým kodónom, s cieľom zlepšiť úroveň expresie exogenných génov, špeciálne eukaryotických génov, v prokaryotických systémoch. Pôsobí od štamu BL21 a niesie chloramfenikolodolný plázmid pRARE, ktorý dopĺňa šesť tRNA odpovedajúcich retým kodónom (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC a GGA), ktoré pôvodne chýbali v E. coli, poskytujúc tak „univerzalnejšiu“ expresiu bielecí.

Záver

Tri hlavné faktory pre úspešnú produkciu rekombinantných bílkovín sú nositeľ, vektor a podmienky kultúry. Na základe pochopenia fyzikálno-chémickych vlastností rekombinantnej bílkoviny, jedinečných výhod každého štamu a špecifických potrieb experimentu by sa mala vybrať najvhodnejšia hospodárka. Okrem toho je potrebné optimalizovať faktory ako plazmidové vektory, teplota a indukátory na posilnenie expresie bílkovín.

Yaohai Bio-Pharma aktivne hľadá globálnych partnerov, ktorí sú inštitúciami alebo jednotlivcami, a ponúka najkonkurenceschopnejšie odmeny v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]