Produkcia rekombinantného proteínu: Upravené kmene E. coli

Escherichia coli (E. coli) zohrala významnú úlohu pri produkcii rekombinantných proteínov v biofarmaceutickom priemysle a slúžila ako prvý expresný vektor na výrobu biologickej medicíny. E. coli sa okrem iných výhod môže pochváliť rýchlym rastom, pohodlnou genetickou manipuláciou a rýchlou syntézou rekombinantných proteínov. Rozsiahle modifikácie urobili z E. coli optimálnu voľbu pre expresiu proteínu, čo viedlo k návrhu rôznych geneticky upravených kmeňov E. coli.

Yaohai Bio-Pharma sa špecializuje na poskytovanie komplexných outsourcingových služieb pre fermentáciu, čistenie, vývoj procesov formulácií a výrobu série biofarmaceutík pomocou expresných systémov E. coli. Vzhľadom na rozsiahle skúsenosti Yaohai sme zhrnuli, že štyri bežné kmene E. coli sa používajú na produkciu rekombinantných proteínov a ich vlastnosti.

kmeň BL 21

Kmeň BL21 odvodený od E. coli B línie nemá Lon proteázu a vonkajšiu membránovú proteázu OmpT. Lon proteáza primárne degraduje exogénne proteíny, zatiaľ čo OmpT degraduje hlavne proteíny extracelulárnej matrice. Neprítomnosť týchto dvoch kľúčových proteáz môže účinne zabrániť degradácii rekombinantných proteínov.

Origami kmeň

Kmeň Origami, derivát E. coli K-12, má mutácie v tioredoxínreduktáze a glutatiónreduktáze, ktoré uľahčujú tvorbu správne poskladaných proteínov obsahujúcich disulfidové väzby a zvyšujú rozpustnosť proteínov. Kmeň Origami, vrátane Origami, Origami 2 a Origami B, je vhodný na expresiu aktívnych proteínov obsahujúcich disulfidové väzby.

SHuffle kmeň

Kmeň SHuffle konštitutívne exprimuje disulfidovú väzbu izomerázu DsbC v cytoplazme, čím podporuje tvorbu správnych disulfidových väzieb v oxidovaných proteínoch. Slúži tiež ako molekulárny chaperón na skladanie proteínov, čím pomáha pri vytváraní správnej konformácie.

Kmeň Rosetta

Kmeň Rosetta dopĺňa E. coli tRNA zodpovedajúcimi vzácnym kodónom s cieľom zlepšiť úroveň expresie exogénnych génov, najmä eukaryotických génov, v prokaryotických systémoch. Odvodený z BL21 a nesúci plazmid pRARE rezistentný na chloramfenikol, dopĺňa šesť tRNA zodpovedajúcich vzácnym kodónom (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC a GGA), ktoré sa pôvodne nevyskytovali v E. coli, čo poskytuje „univerzálnejšiu“ proteínovú expresiu.

záver

Tri hlavné faktory úspešnej produkcie rekombinantných proteínov sú hostiteľ, vektor a kultivačné podmienky. Na základe pochopenia fyzikálno-chemických vlastností rekombinantného proteínu, jedinečných výhod každého kmeňa a špecifických potrieb experimentu by sa mal vybrať najvhodnejší hostiteľ. Okrem toho by sa mali optimalizovať faktory, ako sú plazmidové vektory, teplota a induktory, aby sa zvýšila expresia proteínu.

Yaohai Bio-Pharma tiež aktívne hľadá inštitucionálnych alebo individuálnych globálnych partnerov a ponúka najkonkurencieschopnejšiu kompenzáciu v tomto odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]