Inovatívne techniky zostavovania pre rozsiahlu syntézu génov

Technológia montáže na syntézu veľkých fragmentov DNA od nuly je základným kameňom syntézy génov, ktorá zahŕňa metódy ako BioBrick™, TAR, BglBrick, Golden Gate, montáž Gibson, CPEC a Overlap PCR. Kvôli obmedzeniam súčasnej technológie pri presnej syntéze DNA dĺžky génu v jedinom kroku je potrebné kombinovať techniky zostavovania in vitro a in vivo na zostavenie fragmentov oligonukleotidov syntetizovaných v segmentoch do dlhých fragmentov DNA.

Techniky montáže in vitro

Sú rozdelené do rôznych metód na základe veľkosti fragmentov a sekvenčných charakteristík, so spoločnou požiadavkou na použitie nástrojových enzýmov. Overlap PCR, založená na metóde DNA polymerázy, je jednoduchá a rýchla. Metódy BioBrick a BglBrick, ktoré sa spoliehajú na izoschizoméry, umožňujú štandardizované zostavenie, aj keď metóda BioBrick nie je vhodná pre fúzne proteíny. Klonovacia metóda Golden Gate, založená na reštrikčných enzýmoch typu IIS, umožňuje účinnú bezproblémovú ligáciu viacerých fragmentov. Metóda zostavy Gibson, ktorá využíva kombináciu viacerých nástrojových enzýmov, umožňuje bezproblémovú ligáciu s veľkosťou fragmentov dosahujúcou niekoľko stoviek kb. Štandardizovaný dizajn komponentov DNA zvyšuje mieru využitia existujúcich fragmentov.

Techniky montáže in vivo

Hoci in vitro zostavené fragmenty môžu dosiahnuť veľkosť niekoľko stoviek kb, výťažok je často nedostatočný, čo si vyžaduje amplifikáciu pomocou organizmov ako napr. Escherichia coli. Pri zostavovaní fragmentov presahujúcich 20 kb sa často používajú rekombinantné systémy v organizmoch, vrátane Bacillus subtilis, kvasiniek a upravených baktérií. Kvasinky, ako bežne používaný hostiteľ, sú už mnoho rokov uznávané pre svoju účinnú homológnu rekombináciu. Môže sa použiť na zostavenie umelých chromozómov až do dĺžky niekoľkých megabáz (Mb). Okrem toho Saccharomyces cerevisiae vykazuje mimoriadnu toleranciu k dĺžke chromozómov, čo poskytuje teoretický základ pre využitie kvasiniek na konštrukciu ultra dlhých chromozómov vo vyšších organizmoch.

použitie

Yaohai Bio-Pharma primárne využíva na syntézu génov dve metódy zostavovania: zostavenie ligázy a zostavenie DNA polymerázy. Metóda zostavenia ligázy spája prekrývajúce sa a hybridizované 5'-fosforylované oligonukleotidové fragmenty do dvojvláknovej DNA pomocou DNA ligázy. Metóda zostavovania polymerázy využíva DNA polymerázu na rozšírenie prekrývajúcich sa oligonukleotidových fragmentov hybridizáciou, získaním zmesi rôznych dĺžok a nakoniec amplifikáciou úspešne zostavených fragmentov s plnou dĺžkou pomocou primérov. Yaohai's môže pomôcť klientom uspokojiť špecifické požiadavky v génovej syntéze.

Aktívne tiež hľadáme inštitucionálnych alebo individuálnych globálnych partnerov. Ponúkame najkonkurencieschopnejšiu kompenzáciu v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]