Podpora metód úpravy reporter RNA

Keď sa rozhodujeme, ktorá metóda úpravy reporterovej mRNA je preferovaná, jednoznačnej odpovede nie je. Každá metóda a reporterový gen má vlastné výhody a vhodné scénáre použitia. Tu sú niektoré bežné metódy úpravy mRNA a reporterové gene spolu s ich charakteristikami a vhodnosťou.

metódy úpravy mRNA

Metylacia:

1. m6A : Spojená so stabilitou mRNA, splicingom, prekladom a spracovaním miRNA. Výzvami pri detekcii sú výber antitela a lokализácia.
2. 5' Cap Nm : Zvyšuje stabilitu, splicing, polyadenyláciu a jadrový export. Pomáha rozlišovať sebauru RNA od cudziej RNA.
3. Pseudouridylovanie : Mení kodóny, zvyšuje stabilitu a reaguje na stres. Katalyzované pseudouridin syntázami.

Úvod neprírodných nukleotidov:

1. Prijaté počas transkripcie s dvojitou chemickou úpravou. Zvyšuje stabilitu, efektívnosť a výraz bílkovín.

Reportérne gény

1. Gén zelené fluoresecetnej proteíny (GFP) : Výhody: Jednoduché detekovanie, stabilné fluorescenčné vlastnosti, netoxické pre bunky, vhodné na vysoce rozlišovaciu fotografiu živých buniek. Nevýhody: Obmedzená intenzita fluorescencie.
2. Zintenzívnená zelená fluorescenčná proteína (eGFP) : Výhody: Presahujúca o viac než šesťkrát väčšiu jasnosť ako divoký typ GFP, čo ju robí vhodnejšou ako reportérny gén pre štúdium expresie génu, regulácie, diferenciácie buniek a lokálizácie a prenášania bílkovín v organizme.
3. Červené fluorescenčné proteíny (napr., mCherry) : Výhody: Dlhšie vlnové dĺžky exctívacie a emisie, čo spôsobuje nižší pozadie počas intrabunkovej fotografovanie, vynikajúca fluorescenčná jasnosť a fotostabilita a nižšia bunková toxickosť. Nevýhody: Môže byť menej často používaná ako GFP v určitých experimentálnych podmienkach.
4. Luciferáza svetličiek : Výhody: V prítomnosti ATP, magneziových íonov a kyslíka môže katalyzovať oxidáciu luciferínu na oxi-luciferín, pričom sa vyžiara bioluminescencia. Je vhodné na použitie ako kontrola pre štúdium efektívnosti prekladu cieľových génov v mäkkotvarových bunkách, bunek schopností a in vivo imaginačných asesmentoch.

Záver

Keď sa rozhoduje, ktorá metóda úprav mRNA reportéra je preferovaná, závisí to od konkrétnych experimentálnych cieľov, vedeckých pozadí a experimentálnych podmienok. Napríklad, ak je potrebná vysoká citlivosť, eGFP môže byť lepšou voľbou. Ak je potrebné obrazovanie na dlhšie vlnové dĺžky pre zníženie pozadia interferencie, červené fluorescenčné proteiny ako mCherry môžu byť vhodnejšie. Okrem toho, na základe konkrétnych požiadaviek na úpravu mRNA (napr., zvyšovanie stability, zlepšovanie efektívnosti prekladu), môže byť vybraná príslušná úpravná metóda.

Jako prvé a najväčšie mikrobiálne biologické CRDMO v Veľkej Číne ponúka Yaohai Bio-Pharma kompletné štandardizované riešenia alebo samostatné služby, ktoré sa rozsiahnu od syntézy RNA, inžinierskeho dizajnu a konštrukcie štamu, vyvíjanie horného a dolného toku procesu, po výrobu aktívnej látky na úrovni GMP alebo ne-GMP, až po doplnkové služby pre rôzne formy, ako sú mRNA, circRNA, plazmidová RNA, rekombinantné proteiny, peptidy, enzymy, jednodoménové antitela a VLP pre ľudskú a veterinársku úlohu.

Yaohai Bio-Pharma aktivne hľadá globálnych partnerov, ktorí sú inštitúciami alebo jednotlivcami, a ponúka najkonkurenceschopnejšie odmeny v odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]