Championing Reporter RNA Modifikačné metódy

Pri výbere, ktorý spôsob modifikácií reportérovej mRNA je výhodnejší, neexistuje definitívna odpoveď, pretože každá metóda a reportérový gén má svoje vlastné výhody a použiteľné scenáre. Tu sú niektoré bežné metódy modifikácie mRNA a reportérové ​​gény spolu s ich charakteristikami a vhodnosťou.

Metódy modifikácie mRNA

Metylácia:

1. m6A: Súvisí so stabilitou mRNA, zostrihom, transláciou a spracovaním miRNA. Detekčné výzvy zahŕňajú výber a lokalizáciu protilátok.
2. 5' Cap Nm: Zvyšuje stabilitu, spájanie, polyadenyláciu a jadrový export. Pomáha rozlíšiť vlastnú RNA od cudzej RNA.
3. Pseudouridylácia: Mení kodóny, zvyšuje stabilitu a reaguje na stres. Katalyzované pseudouridínsyntázami.

Predstavenie neprírodných nukleotidov:

1. Zavedené počas transkripcie so stratégiou dvojitej chemickej modifikácie. Zvyšuje stabilitu, účinnosť a expresiu bielkovín.

Reportér Genes

1. Gén zeleného fluorescenčného proteínu (GFP): Výhody: Jednoduchá detekcia, stabilné fluorescenčné vlastnosti, netoxické pre bunky, vhodné na zobrazovanie živých buniek. Nevýhody: Obmedzená intenzita fluorescencie.
2. Vylepšený zelený fluorescenčný proteín (eGFP): Výhody: Viac ako 6-krát jasnejší ako GFP divokého typu, vďaka čomu je vhodnejší ako reportérový gén na štúdium génovej expresie, regulácie, bunkovej diferenciácie a lokalizácie a transportu proteínov v organizmoch.
3. Červené fluorescenčné proteíny (napr. mCherry): Výhody: Dlhšie vlnové dĺžky excitácie a emisie, výsledkom čoho je nižšie pozadie počas intracelulárneho zobrazovania, vynikajúci jas fluorescencie a fotostabilita a nižšia bunková toxicita. Nevýhody: V určitých experimentálnych podmienkach sa nemusí používať tak bežne ako GFP.
4. Luciferáza svetlušiek: Výhody: V prítomnosti ATP, horčíkových iónov a kyslíka môže katalyzovať oxidáciu luciferínu na oxyluciferín, pričom dochádza k vyžarovaniu bioluminiscencie. Je vhodný na použitie ako kontrola na štúdium účinnosti translácie cieľových génov v cicavčích bunkách, bunkovej životaschopnosti a in vivo zobrazovacích testov.

záver

Pri výbere, ktorá metóda modifikácií reportérovej mRNA je výhodnejšia, závisí to od konkrétnych experimentálnych cieľov, pozadia výskumu a experimentálnych podmienok. Napríklad, ak je potrebná vysoká citlivosť, eGFP môže byť lepšou voľbou. Ak je na zníženie rušenia pozadia potrebné zobrazenie pri dlhších vlnových dĺžkach, vhodnejšie môžu byť červené fluorescenčné proteíny ako mCherry. Okrem toho, na základe špecifických potrieb modifikácie mRNA (napr. zvýšenie stability, zlepšenie účinnosti translácie), môže byť vybraný zodpovedajúci spôsob modifikácie.

Yaohai Bio-Pharma ako prvé a najväčšie CRDMO pre mikrobiálne biologické látky vo Veľkej Číne ponúka komplexné riešenia šité na mieru alebo samostatné služby od syntézy RNA, kmeňového inžinierstva a konštrukcie, upstream a downstream vývoja procesov až po GMP alebo iné. -Výroba liečivých látok na úrovni GMP a služby plnenia a dokončovania pre rôzne modality, ako sú mRNA, circRNA, plazmidová RNA, rekombinantné proteíny, peptidy, enzýmy, jednodoménové protilátky a VLP na humánne a veterinárne použitie.

Yaohai Bio-Pharma tiež aktívne hľadá inštitucionálnych alebo individuálnych globálnych partnerov a ponúka najkonkurencieschopnejšiu kompenzáciu v tomto odvetví. Ak máte akékoľvek otázky, neváhajte nás kontaktovať: [email protected]