Explore o Fascinante Mundo da Precipitação de Cloreto de Lítio

A precipitação de cloreto de lítio é amplamente utilizada para separar RNA da solução.

Aqui está a divisão do processo:

1. Preparação da amostra: Comece com uma amostra contendo RNA, como in vitro mistura de transcrições.

2. Adição de cloreto de lítio: Adicione um volume apropriado de solução concentrada de cloreto de lítio à solução de RNA.

3. Incubação: Após adicionar cloreto de lítio, a solução é incubada a baixa temperatura, geralmente em torno de -20°C. Isso faz com que as moléculas de RNA se precipitem da solução.

4. Centrifugação: Após a incubação, a solução é centrífugada a alta velocidade. Isso separa o RNA precipitado do restante da solução, que contém impurezas.

5. Lavagem: Uma vez concluída a centrifugação, remova cuidadosamente o sobrenadante sem interferir na precipitação do RNA. Lave as partículas de RNA com etanol frio ou álcool isopropílico para remover quaisquer impurezas restantes.

6. Reconstituição do RNA: Após a lavagem, o precipitado de RNA é secado brevemente ao ar e depois re-suspenso em um buffer apropriado, como o buffer TE (buffer Tris-EDTA) ou água destilada. Pipetagem suave ou correntes de vórtice podem ser necessárias para reconstituir adequadamente o RNA.

7. Quantificação e análise: Por fim, o RNA isolado é quantificado por espectrofotometria ultravioleta ou método de fluorescência. Isso determina a concentração e pureza da amostra de RNA, o que é importante para aplicações downstream, como encapsulação LNP e transfeção celular.

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