Låse opp hemmelighetene til høykvalitets plasmidekstraksjon

Plasmidekstraksjon er avgjørende for forskere. Som genvektorer er plasmider livsviktige i vaksineforskning og genterapi, der kvaliteten betyr noe. Nøkkelkvalitetsfaktorer inkluderer supercoil-andel og endotoksininnhold. Regelverket varierer: FDA ≥80 %, SMPA ≥85 %, NMPA ≥90 %, med <5 % lineært/åpent-sirkulært DNA. Kunder foretrekker ofte ≥95 % supercoil. Endotoksinnivåer er: forskning (>50 EU/µg), transfeksjon (<50 EU/µg) og endotoksinfri (<0.1 EU/µg).

Supercoiled plasmid DNA

Plasmider fra Escherichia coli inkluderer supercoiled (SC), åpen-sirkulær (OC) og lineær (L) DNA. Høy SC-andel øker transfeksjonseffektiviteten og uttrykket. For eksempel er en 85.45 % SC-plasmids transfeksjon 2.5x høyere, og et 93.28 % SC-plasmids HGF-ekspresjon er 1.8x høyere, noe som bekrefter SC-DNAs overlegenhet.

Åpent sirkulært DNA: Når en tråd av dobbelttrådet DNA går i stykker, blir den superkveilede strukturen løs, og danner et åpent sirkulært plasmid med et større volum som migrerer langsomst under elektroforese og er plassert på toppen.

Lineær DNA: Når begge trådene av plasmid-DNA brytes, dannes det en lineær struktur, med et relativt mindre volum som migrerer raskere enn åpen-sirkulært DNA, men langsommere enn supercoiled DNA, plassert på andreplass.

Supercoiled DNA: To helikser flettes sammen og vrir seg til en supercoiled struktur basert på DNA-helixen. Den har det minste volumet og migrerer raskest under elektroforese, plassert i bunnen.

Kvantitativ analyse av supercoiled proporsjon

Labs bruker agarosegelelektroforese (AGE) og Gel-Pro Analyzer for å bedømme supercoiled proporsjoner via elektroforesebilder. Ett bilde viser 97.539 % SC DNA, mens et annet viser 63.833 % SC og 36.167 % OC DNA (lineært DNA ikke synlig).

Hemmeligheten til endotoksin i plasmider

Endotoksin er en komponent i det ytre laget av celleveggen til gramnegative bakterier, frigjort etter bakteriedød eller lysis, og inneholder giftig lipopolysakkarid A. Under plasmidekstraksjon kommer endotoksin inn i lyseringsløsningen, påvirker transfeksjonseffektiviteten og utløser uspesifikke immunresponser, noe som fører til til falske positive i eksperimenter.

Kvantitativ og kvalitativ analyse av endotoksin

Limulus amebocytt lysat (LAL) testen påviser endotoksin via agglutinering med 2-keto-3-deoksyoktonsyre (KDO) i lipopolysakkaridet (LPS). Det er kvalitativt og semikvantitativt, noe som indikerer tilstedeværelse av endotoksin gjennom koagulering eller fargeendring når det blandes med prøver.

Yaohai Bio-Pharma tilbyr endotoksinfrie supercoiled plasmider. Outsourcing til Yaohai øker transfeksjon og uttrykkseffektivitet. Leverte plasmider har en ≥95 % SC-andel (gjennomsnittlig 85 %±10 %) og endotoksinnivåer ≤0.1, ≤0.01 eller ≤0.005 EU/μg.

Vi søker også aktivt etter institusjonelle eller individuelle globale partnere. Vi tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har spørsmål, kan du gjerne kontakte oss: [email protected]