Kvalitetskontroll og anvendelser av rekombinante proteiner

Kvalitetskontroll av rekombinante proteiner er avgjørende for påliteligheten og reproduserbarheten til eksperimentelle data. Hvert trinn, fra prosjektdesign til produksjonsprosess, krever strenge kvalitetskontrollstrategier.

Kvalitetskontrollstrategier

Industrisektoren følger strenge standard driftsprosedyrer, mens det akademiske samfunnet må forbedre faglig kunnskap for å forbedre datareproduserbarheten. Proteiner med spesifikke biologiske anvendelser eller biokjemiske egenskaper krever skreddersydde kvalitetskontrollstrategier (QC).

Utfordrende eksempler og løsninger

Yaohai Bio-Pharma har lang erfaring innen rekombinant proteinproduksjon og rensing, kombinert med et team av eksperter, som sikrer at proteinproduksjonen din fullføres med høy renhet. Ved å utnytte vår erfaring fra hundrevis av prosjekter, oppsummerer Yaohai vennlig hvordan man kan optimalisere proteinrensing.

Nukleinsyrebindende proteiner: Trinn for fjerning av nukleinsyre, slik som nukleaser eller PEI-utfelling, er nødvendige. A260nm/A280nm-forholdet overvåkes for å oppdage nukleinsyreforurensning.

Mus Ferritin Heavy Chain 1 for cryo-EM: Rensetrinn må optimaliseres, og nukleaser må tilsettes for å redusere A260nm/A280nm-forholdet og sikre proteinrenhet.

Chimeric Protein Human dsRBEC: Cellelyse bruker en buffer som inneholder urea, etterfulgt av refolding på kolonne for å oppnå funksjonelt aktive proteiner.

Proteiner som binder toverdige kationer: Spesifikke toverdige kationer må tilsettes under ekspresjon og rensing, og chelateringsmidler bør unngås.

Jern-svovelproteiner: Imidazol bør unngås for å forhindre forstyrrelse av [2Fe ± 2S]-klyngen, for å sikre korrekt proteinfolding og funksjon.

Løselig fragment av LLT1: Mutant design optimerer disulfidbindingsdannelse og proteinfolding, noe som resulterer i stabile proteiner med høyt utbytte.

CLK1 Kinase-krystallisering: Samekspresjon med λ-fosfatase fjerner fosfater fra fosforyleringssteder, og størrelseseksklusjonskromatografi (SEC) og anionbytterkromatografi brukes for å oppnå homogen CLK1 uten heterogen fosforylering.

Proteiner for antigenbruk: Renhetsvurdering er nødvendig for å unngå forurensning med svært immunogene proteiner. For strukturelle epitop-antistoffer må den tredimensjonale konformasjonen av antigenet opprettholdes.

Aggregasjonsutsatte proteiner: Strategier som screening av forskjellige stammer og senking av dyrkingstemperaturer brukes for å begrense aggregeringsproblemer, og raske rensestrategier er utformet.

Endotoksin fjerning: Metoder som positiv ladningskromatografi og polykationligandaffinitetskromatografi fjerner endotoksiner, og sikrer at LPS-nivåene er under bruksgrensene.

Proteinkomplekser: Underenheter uttrykkes separat og settes sammen in vitro eller co-uttrykt for å danne funksjonelle komplekser. Kompleks integritet blir evaluert ved homogenitet og molar masse.

Konklusjon

Proteinproduksjon starter med strategisk design, med tanke på biokjemiske egenskaper og bruksområder. Under ekspresjon, rensing og QC er forhold og metoder optimalisert for stabilitet, ikke-aggregering og naturlig tilstand. Rensede proteiner tjener forskjellige nedstrømsbruk, som biofysisk karakterisering.

Yaohai Bio-Pharma søker også aktivt etter institusjonelle eller individuelle globale partnere og tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har spørsmål, kan du gjerne kontakte oss: [email protected]