Optimalisering av Reneseprosessen for Rekombinant Menskelig Insulin

I de siste årene har veksten i antall diabetespasienter drivet etterspørselen etter insulin, men billig insulin er i kort supply. Effektiv og økonomisk insulinproduksjon er avgjørende. Produksjonen skjer hovedsakelig via Escherichia coli (E. coli) og gær på grunn av rask vekst og lave kostnader, mens E. coli står overfor kompleks nedstrømsbehandling.

Oversikt over Nedstrømsbehandling:

Renning av rekombinant menneskelig insulin fra E. coli inklusjonslegemer involverer flere trinn, herunder gjenopptak, vasking, løseliggjøring og oksidasjon, klyving, buffertbytte, kromatografisk renning, nedsetting, renaturering, enzymatisk klyving og formulering.

Yaohai Bio-Pharma har omfattende erfaring med produksjon og renning av rekombinant insulin, sammen med et team av ekspertiser, som sikrer at din insulinproduksjon fullføres med høy effektivitet. Ved å utnytte vår erfaring fra hundrevis av prosjekter, summerer Yaohai hvordan man kan optimere Nedstrømsrenningsprosessen for Rekombinant Menneskelig Insulin.

Gjenopptak av inklusjonslegemer og vasking:

Celler deles opp ved bruk av mekaniske metoder (som ultralyd, høytrykkshomogenisering) eller lysozymbehandling, etterfulgt av vaskingsbuffer (som inneholder urea, Triton X-100, osv.) for å fjerne forurensetninger. Under vasking må parametere optimeres for å sikre proteinkvalitet samtidig som kostnader kontrolleres.

Opløsning av inklusjonslegemer og oksidasjon:

Høykonsentrasjon av denaturanter (som guanidinhydroklorid og urea) brukes for å gjøre inklusjonslegemer løselige, med tillegg av dithiotreitol eller β-merkaptoetanol for å forhindre bildingen av feil disulfidbindinger. pH og temperatur påvirker betydelig opløsnings- og oksidasjonsreaksjoner.

Kleaving og bufferutveksling:

Cyanogenbromidspaltning brukes for å fjerne den N-termrale startaminoasiden, men den stiller problemer med toksisitet og lav spesifisitet. Gjennom dialyse, ultrafiltrasjon eller størrelseseksklusjonskromatografi fjerner bufferveksling farlige reaktanter i forberedelse på etterfølgende operasjoner.

Kromatografisk renning og nedsetting:

Flere kromatografiske teknikker brukes for å renne insulin, inkludert affinitetskromatografi, jon-oppvekslingskromatografi, omvendt-fasekromatografi, hydrofob interaksjonskromatografi og størrelseseksklusjonkromatografi. Nedsetningsmetoder, som pH-nedsetting og sintering av zink, brukes for å fjerne forurensetninger og konsentrere proteiner.

Renaturering:

Det løselige proteinet dylles i en renatureringsbuffer for å fremme den riktige bildingen av disulfidbindinger og proteinfolding. Protein-folding væskechromatografi og dialyse er også metoder som brukes for renaturering.

Enzytmatiske spaltninger og formulering:

Trypsin og carboxypeptidase B brukes for å klove C-peptidet, noe som danner den aktive insulin-heterodimeren. Til slutt brukes krysfalling og lyofilisering for å fjerne resterende salt og buffer, for å forberede en stabil formulering. Spesifikke tilsetninger (som sikk og protamin) legges til for å møte ulike kliniske behov.

Konklusjon:

Nedstrømsbehandling av insulin fra E. coli er kompleks. Fremtidig fokus bør være rettet mot å optimere disse trinnene for effektiv og økonomisk produksjon for å møte etterspørselen og redusere kostnadene.

Yaohai Bio-Pharma søker også aktivt globale partnere, både institusjonelle og enkeltpersoner, og tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har noen spørsmål, hesitate ikke å kontakte oss: [email protected]