Optimalisering av renseprosessen for rekombinant humant insulin

De siste årene har diabetespasientveksten drevet insulinetterspørselen, men rimelig insulin er mangelvare. Effektiv, økonomisk insulinproduksjon er avgjørende. Hovedsakelig produsert via Escherichia coli (E. coli) og gjær på grunn av rask vekst og lave kostnader, står E. coli overfor kompleks nedstrøms prosessering.

Oversikt over nedstrømsbehandling:

Rensing av rekombinant humant insulin fra E. coli inklusjonslegemer involverer flere trinn, inkludert utvinning, vasking, solubilisering og oksidasjon, spaltning, bufferutveksling, kromatografisk rensing, utfelling, renaturering, enzymatisk spaltning og formulering.

Yaohai Bio-Pharma har lang erfaring innen rekombinant insulinproduksjon og rensing, kombinert med et team av eksperter, som sikrer at insulinproduksjonen din fullføres med høy effektivitet. Ved å utnytte vår erfaring fra hundrevis av prosjekter, oppsummerer Yaohai vennlig hvordan man kan optimalisere nedstrøms renseprosessen for rekombinant humant insulin.

Inkludering av kroppsgjenoppretting og vask:

Celler blir forstyrret ved hjelp av mekaniske metoder (som ultralydbehandling, høytrykkshomogenisering) eller lysozymbehandling, etterfulgt av vaskebuffere (som inneholder urea, Triton X-100, etc.) for å fjerne urenheter. Under vask må parametere optimaliseres for å sikre proteinkvalitet samtidig som kostnadene kontrolleres.

Inkludering av kroppens solubilisering og oksidasjon:

Høykonsentrasjonsdenatureringsmidler (som guanidinhydroklorid og urea) brukes for å solubilisere inklusjonslegemer, med ditiotreitol eller β-merkaptoetanol tilsatt for å forhindre dannelsen av feil disulfidbindinger. pH og temperatur påvirker solubiliserings- og oksidasjonsreaksjonene betydelig.

Spalting og bufferutveksling:

Cyanogenbromidspalting brukes til å fjerne den N-terminale initierende aminosyren, men det utgjør toksisitet og problemer med lav spesifisitet. Gjennom dialyse, ultrafiltrering eller størrelseseksklusjonskromatografi, fjerner bufferutveksling skadelige reagenser som forberedelse til påfølgende operasjoner.

Kromatografisk rensing og utfelling:

Flere kromatografiske teknikker brukes for å rense insulin, inkludert affinitetskromatografi, ionebytterkromatografi, revers-fase kromatografi, hydrofob interaksjonskromatografi og størrelseseksklusjonskromatografi. Utfellingsmetoder, som pH-utfelling og sinkkrystallisering, brukes for å fjerne urenheter og konsentrere proteiner.

Renaturering:

Det solubiliserte proteinet fortynnes i en renatureringsbuffer for å fremme riktig dannelse av disulfidbindinger og proteinfolding. Proteinfolding væskekromatografi og dialyse er også metoder som brukes for renaturering.

Enzymatisk spaltning og formulering:

Trypsin og karboksypeptidase B brukes til å spalte C-peptidet, og danner den aktive insulinheterodimeren. Til slutt blir krystallisering og lyofilisering brukt for å fjerne gjenværende salter og buffere, for å fremstille en stabil formulering. Spesifikke tilsetningsstoffer (som sink og protamin) tilsettes for å møte ulike kliniske behov.

Konklusjon:

Nedstrøms prosessering av insulin fra E. coli er kompleks. Fremtidig fokus bør være på å optimalisere disse trinnene for effektiv, økonomisk produksjon for å møte etterspørselen og redusere kostnadene.

Yaohai Bio-Pharma søker også aktivt etter institusjonelle eller individuelle globale partnere og tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har spørsmål, kan du gjerne kontakte oss: [email protected]