Optimalisering av E. colizellintegritet for biofarmaceutisk produksjon

Innenfor biopharmasutikksplassen spiller Escherichia coli (E. coli) en avgjørende rolle som vert for uttrykk av rekombinante proteiner. Celleværet til E. coli er avgjørende for proteinyield, kvalitet og produksjonskostnader. Dette været omfatter hovedsakelig strukturen og funksjonen av den indre membranen (IM) og den ytre membranen (OM).

Yaohai Bio-Pharma har 15 år med E. coli-fermentering og uttrykk av rekombinante proteiner. Vi bruker ulike strategier for å opprettholde høyt cellevær hos E. coli, og plasmidgjennomsetningen overskrider 1g/L innenfor en odlingscyklus på 30 timer. Ved å dra nytte av den omfattende erfaringen i mikrobiell uttrykk, har Yaohai Bio-Pharma samlet flere effektive strategier for å overvåke og forbedre celleværet til E. coli under biopharmasutisk produksjon.

Teknikker for å overvåke celleværet til E. coli

Flow sitometri: Bruker fluoreserende farger for å differensiere mellom celltilstander, som propidium iodide for å oppdage cellevekt og SYTO9 for å vurdere OM-durabelheten. Imidlertid krever det høye kostnader for farger og komplekse operasjoner.

Kolorimetriske metoder: Viser cellesprett ved å oppdage DNA-innhold, enzymaktiviteter etc. i avleppet, som ved bruk av PicoGreen reagenssett og alkalisk fosfataseaktivitetstester. Disse metodene er imidlertid kræftige og krever dyre reagentier.

Høytrykksgjenstandslikning: Brukes til avsluttede målinger av ekstracelleære produktkonsentrasjoner for å vurdere OM-lekkasje. Likevel er automatiseringen av denne metoden kompleks og analysetiden er lang.

Vibrasjonsspektraskopiteknikker: Som nær-infrarød og midt-infrarødspektrascope, som har potensielle anvendelser men krever at spektral interferens og dataanalyseutfordringer blir overkommet.

Dielektrisk spektroskopi: Vurderer membranintegritet ved å måle impedansen av celleheter, hvilket tillater reeltids-oppfølging online. Imidlertid er det følsomt for støy og kalibrering er vanskelig.

Biosensorer: Kan oppdage sammensettelser som leker ut fra cellene eller periplasmen, men møter utfordringer som vanskeligheter med sensorregenerering.

Viskositets- og tetthetsmålinger: Lav kostnad og rask analyse, men mangel på selektivitet og krever at flere batch-data tas i betraktning for vurdering.

Faktorer som påvirkerzellintegritet

Staminnretting: Endrer OM-integriteten gjennom genetisk modifisering, for eksempel ved å mutere lipoproteingener, men kan påvirke stamvekst.

Indusert stress: Overproduksjon av rekombinante proteiner fører til en metabolisk byrde, som påvirker cellulær fysiologi. Derfor er rimelig regulering av uttrykknivåer nødvendig.

Substratfødningsrate: Både for høy og for lav fødningsrate påvirker cellelyse og OM-integritet.

Temperatur og aerasjon: Høy temperatur og lav tilgjengelighet av oksygen øker uttrykksstress og utslipp av OM, henholdsvis, men de spesifikke effektene varierer.

Osmotikk: Brukes for å frigjøre periplasmatiske proteiner, men skaderzellviableheten, hvilket begrenser deres anvendelse.

Konklusjon Fremtidig forskning må granske dyptere inn i mekanismene og vilkårene for membranreparasjon for å nøyaktig kontrollere cellulært membranintegritet. Å optimalisere overvåkingsmetoder og analysere påvirkningsfaktorer forventes å forbedre produktkvaliteten, dermed å drive utviklingen av biomedisinindustrien.

Vi søker også aktivt etter institusjonelle eller individuelle globale partnere. Vi tilbyr den mest konkurransedyktige kompensasjonen i bransjen. Hvis du har noen spørsmål, vennligst ikke nøl med å kontakte oss på [email protected]