mRNR vientisumas
MRNR vientisumo analizės reikšmė
iRNR yra pripažintos dėl joms būdingo nestabilumo ir yra jautrios fragmentacijai esant išoriniams veiksniams, ypač in vitro transkripcijos (IVT) ir gryninimo procesų metu, kai visur esančios nukleazės kelia iššūkį. MRNR vientisumo įvertinimas yra labai svarbus kuriant mRNR pagrindu pagamintus vaistus, užtikrinant saugumą ir produktų prieinamumą.
Yaohai-BioPharma teikia išsamias mRNR vientisumo tikrinimo paslaugas, taikydama tokius metodus kaip agarozės gelio elektroforezė (AGE), kapiliarinė elektroforezė (CEG) ir aukštos kokybės skysčių chromatografija (HPLC), laikantis griežtų kokybės standartų tiek atliekant tyrimus, tiek atliekant klinikinius tyrimus.
Reguliavimo reikalavimai mRNR vientisumui
Remiantis PSO reguliavimo svarstymais, „mRNR struktūros vientisumas laikomas kritiniu kokybės požymiu, leidžiančiu išsiskirti mRNR. Taigi reikia kontroliuoti mRNR vientisumą, nepažeistos mRNR procentą, mRNR fragmentų procentą ir pan.
Analitinis metodas
Analizė |
Metodai |
mRNR vientisumas |
AGE, Agarozėgel elektroforezė |
CGE,Kapiliarinė elektroforezė |
CGE-LIF, kapiliarinė gelio elektroforezė su šviesos sukeltos fluorescencijos aptikimu |
mRNR vientisumas agarozės gelio elektroforezės būdu
Agarozės gelio elektroforezė yra plačiai taikomas būdas įvertinti visos RNR vientisumą. Tai apima RNR mėginio paleidimą ant denatūruojančio agarozės gelio, nudažyto etidžio bromidu arba SYBR Green. Denatūruojantis gelis, sudarytas iš agarozės, palengvina RNR atskyrimą pagal dydį, kai veikia elektros srovė. Kai neigiamo krūvio RNR migruoja link teigiamo gelio galo, mažesni fragmentai juda greičiau, todėl RNR molekulės rūšiuojamos pagal dydį.
mRNR vientisumas kapiliarinio gelio elektroforezės būdu
Kapiliarinė gelio elektroforezė (CGE) yra didelės skiriamosios gebos analitinis metodas, labai svarbus norint įvertinti RNR molekulių vientisumą pagal ilgį. Šis įvertinimas turi reikšmės kokybės užtikrinimui, efektyvumo suvokimui ir gamybos procesų optimizavimui. Panašiai kaip agarozės gelio elektroforezė, CGE naudoja elektros srovę RNR fragmentams atskirti pagal jų krūvį ir dydį. CGE kapiliaras užpildomas atskyrimo gelio matrica, užpilta fluorescenciniais dažais. RNR judėjimas išilgai kapiliarų priklauso nuo jo dydžio, o aptikimas pasiekiamas naudojant ultravioletinių (UV) arba šviesos sukeltos fluorescencijos (LIF) detektorius.
EN
