IVT mRNA 준비

시험관 내 전사(IVT)는 mRNA를 준비하는 데 선호되는 방법으로, 실험실 규모에서 마이크로그램에서 밀리그램의 mRNA를 생산할 수 있습니다. 연구 목적으로 시약 공급업체는 중간 길이(1000-4000개 뉴클레오티드)의 mRNA에 적합한 다재다능한 IVT 반응 시스템을 개발했습니다.

본 논문에서는 실험실 규모에서 사용되는 기존 IVT 반응 시스템과 매우 긴 mRNA(>9000개 뉴클레오티드)에 적합한 IVT 반응 시스템을 포함하여 mRNA의 시험관 내 전사(IVT)에 대해 요약합니다.

키트는 CleanCap AG로 공동 전사 캡핑을 가능하게 하고 m1ψ로 면역원성을 감소시킵니다. DNase I은 잔류 DNA를 제거합니다. 낮은 수율은 혼합 불량, 시약 산화 또는 DNA 템플릿 문제로 인해 발생할 수 있으며, 이는 원심분리, 새로운 시약, 대조군 및 템플릿 양/반응 시간 조정을 통해 완화할 수 있습니다.

야오하이 바이오파마는 형광 단백질(eGFP, mCHERRY), 루시퍼라제, 재조합효소 Cre, 항원 OVA와 같은 단백질을 인코딩하는 다양한 조립식 IVT RNA 제품(액상/동결 건조 분말)과 LNP 완제품을 제공하여 다양한 실험 또는 프로젝트 요구 사항을 충족합니다.

초장거리 mRNA를 위한 IVT 시스템

기존 IVT는 너무 긴 mRNA(>9000 nt)에는 효과가 없을 수 있습니다. IVT 구성 요소에 대한 심층적인 이해와 합리적인 조정이 필요합니다.

DNA 템플릿: 선형화된 플라스미드 또는 상응하는 프로모터 서열을 갖는 PCR 생성물, RNase-free H2O에 용해. 최적의 IVT 조건을 위해 40 nM보다 높은 DNA 템플릿 농도가 권장됩니다.

DTT: 전사 중 효소 활성을 유지합니다. 최적의 효소 활성을 위해 신선한 DTT를 반응 완충액에 첨가해야 합니다.

RNase 억제제: RNase 활동을 억제하고 mRNA 안정성을 유지합니다.

T7 RNA 중합효소: 프로모터 서열에 상응하는 RNA로 DNA 전사를 촉진합니다. T7 RNA 중합효소의 활동은 pH와 마그네슘 이온의 영향을 받습니다.

마그네슘 이온(Mg2+): RNA 중합효소의 보조 인자. 농도가 너무 낮으면 전사 효율이 떨어지고, 농도가 너무 높으면 RNA 분해가 일어납니다. 자유 [Mg2+]는 뉴클레오타이드 농도에 따라 조절해야 합니다. 각 뉴클레오타이드는 하나의 [Mg2+]를 킬레이트하므로 [Mg2+] 농도는 전체 뉴클레오타이드 농도를 초과해야 합니다.

뉴클레오시드 삼인산(NTP): 기질로서 NTP는 RNA의 기본 단위입니다. 7 mM 이상의 NTP 농도는 mRNA 생산에 긍정적인 영향을 미칩니다.

스페르미딘: DNA-효소 복합체를 안정화하고 전사 반응을 자극하지만, 과도한 농도는 억제 효과가 있습니다. 권장 스페르미딘 농도는 1~3 mM입니다.

무기 피로인산가수분해효소(PPase): 무기 피로인산 이온(PPi)의 축적을 방지하기 위해 IVT 반응에 추가되어 Mg2+와의 킬레이션을 피하고 충분한 자유 Mg2+를 보장합니다.

Yaohai Bio-Pharma는 선구적인 기술과 IVT mRNA 경험을 활용하여 시퀀스 설계, IVT RNA 준비(m1ψ 모드 포함), RNA 고리화, 정제, 동결 건조, LNP 캡슐화 및 품질 테스트를 포함한 원스톱 IVT RNA 서비스를 제공합니다.

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