Rekombinanttien Proteiinien Tuotanto: Muokattujen E. coli -pitoisten Käyttö

Escherichia coli (E. coli) on pelannut merkittävää roolia bioteollisuudessa rekombinantien proteiinien tuottamisessa, toimien ensimmäisenä ilmaisuvektorina biologisen lääkeaineen valmistukseen. E. colilla on nopea kasvu, helpot genetiikkaan liittyvät manipulaatiot ja nopea rekombinantien proteiinien synteesi muiden etujen joukossa. Laajat muutokset ovat tehneet E. colista optimaalisen valinnan proteiinien ilmaisulle, mikä on johtanut useiden insinööritettyjen E. coli -lähteiden suunnitteluun.

Yaohai Bio-Pharma erikoistuu tarjoamaan yhdestä lopulliseen ulkoon palveluita E. coli ilmaisujärjestelmien käyttämiseen sarjan biofarmaseeriytuotteiden fermointi-, puhdistus-, kaavauksen kehityksessä ja tuotannossa. Koska Yaohailulla on laaja kokemus, olemme yhteenvetoona todettaneet, että neljä yleistä E. coli -lajiketta käytetään rekombinantien proteiinien tuotantoon ja niiden ominaisuuksiin.

BL 21 -laji

Johdettu E. coli B -linjasta, BL21 -muoto ei sisällä Lon- proteaasia tai ulkoisten muistovaippojen OmpT -proteaaasi. Lon -proteasa degradoi pääasiassa eksogeenejä proteiineja, kun taas OmpT degradoi pääasiassa ekstracellular matrix -proteiineja. Nämä kaksi avaintoteuttavaa proteaasia voidaan tehokkaasti estää rekombinantien proteiinien hajoamisen.

Origami -pilkku

Origami -pilkku, joka on johdettu E. coli K-12: sta, sisältää mutaatiot tioriedoksireduktasiessa ja glutaattiokseduksireduktasiessa, jotka helpottavat oikein kaadettujen disulfidipitoisten proteiinien muodostumista ja parantavat proteiinien ratkeavuutta. Origami -pilkut, mukaan lukien Origami, Origami 2 ja Origami B, ovat sopivia aktiivisten disulfidipitoisten proteiinien ilmaisemiseen.

SHuffle -pilkku

SHuffle-pito kasvattaa disulfidipariisointienzymia DsbC cytoplasmasa, mikä edistää oikeiden disulfidiparien muodostumista oksidoiduissa proteiineissa. Se toimii myös molekulaarisen avustajan roolissa proteiinien kietoutumisessa, auttaen oikean muodon muodostumisessa.

Rosetta-pito

Rosetta-pito täydentää E. coli:ta harvinaisten koodonien vastaavilla tRNA:lla pyrkimyksenä parantaa eksogeidien geenien ilmaisua, erityisesti eukaryoottigenien ilmaisua, prokaryyyttisissa järjestelmissä. Se perustuu BL21:ään ja kantaa kloramfenikoli-kestävän pRARE-plasmidiin, joka täydentää kuusi tRNA:ta, jotka vastaavat harvinaisia koodoneja (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC ja GGA), joita ei alkuperäisessä E. coli:ssa ole, tarjoamalla siten "ylempää" proteiinien ilmausta.

Johtopäätös

Kolme pääasiallista tekijää onnistuneelle rekombinantiproteiinien tuotannolle ovat isäntä, vektori ja kasvuympäristön ehdot. Fyysikemiallisten ominaisuuksien, rekombinantiproteiinin yksilöllisten etujen ja kokeen spesifisten tarpeiden perusteella tulisi valita sopivin isäntä. Lisäksi plasmidivektoreita, lämpötilaa ja indusoivia tekijöitä tulisi optimoida proteiinien ilmaisun parantamiseksi.

Yaohai Bio-Pharma etsii myös aktiivisesti maailmanlaajuja instituutionaalisia tai yksilöllisiä kumppaneita ja tarjoaa kilpailukykyimpien palkkioita teollisuudessa. Jos sinulla on kysymyksiä, ota meihin iloisin yhteyttä: [email protected]