Rekombinanttiproteiinin tuotanto: Muokatut E. coli -kannat

Escherichia colilla (E. coli) on ollut merkittävä rooli rekombinanttiproteiinien tuotannossa biolääketeollisuudessa, ja se toimii ensimmäisenä ekspressiovektorina biologisten lääkkeiden valmistuksessa. E. colilla on nopea kasvu, kätevä geenimanipulaatio ja rekombinanttiproteiinien nopea synteesi muiden etujen ohella. Laajat modifikaatiot ovat tehneet E. colista optimaalisen valinnan proteiinien ilmentämiseen, mikä on johtanut erilaisten muokattujen E. coli -kantojen suunnitteluun.

Yaohai Bio-Pharma on erikoistunut tarjoamaan yhden luukun ulkoistuspalveluita fermentointiin, puhdistukseen, formulointiprosessien kehittämiseen ja biolääkesarjan tuotantoon E. coli -ilmentämisjärjestelmiä käyttäen. Yaohain laajan kokemuksen perusteella tiivistimme, että rekombinanttiproteiinien tuotantoon käytetään neljää yleistä E. coli -kantaa ja niiden ominaisuuksia.

BL 21 -kanta

E. coli B -linjasta johdetusta BL21-kannasta puuttuu Lon-proteaasi ja ulkokalvoproteaasi OmpT. Lon-proteaasi hajottaa ensisijaisesti eksogeenisiä proteiineja, kun taas OmpT hajottaa pääasiassa solunulkoisia matriksiproteiineja. Näiden kahden avainproteaasin puuttuminen voi tehokkaasti estää rekombinanttiproteiinien hajoamisen.

Origami-kanta

Origami-kannassa, E. coli K-12:n johdannaisessa, on mutaatioita tioredoksiinireduktaasissa ja glutationireduktaasissa, mikä helpottaa disulfidisidoksia sisältävien oikein laskostuneiden proteiinien muodostumista ja lisää proteiinien liukoisuutta. Origami-kanta, mukaan lukien Origami, Origami 2 ja Origami B, soveltuu disulfidisidoksia sisältävien aktiivisten proteiinien ilmentämiseen.

Sekoita jännitys

SHuffle-kanta ilmentää konstitutiivisesti disulfidisidos-isomeraasia DsbC sytoplasmassa, mikä edistää oikeiden disulfidisidosten muodostumista hapettuneissa proteiineissa. Se toimii myös molekyylikaperonina proteiinien laskostumiseen ja auttaa oikean konformaation muodostumisessa.

Rosetta-kanta

Rosetta-kanta täydentää E. colia harvinaisia ​​kodoneja vastaavilla tRNA:illa tavoitteenaan parantaa eksogeenisten geenien, erityisesti eukaryoottisten geenien, ilmentymistasoa prokaryoottisissa järjestelmissä. BL21:stä johdettu ja kloramfenikoliresistenttiä pRARE-plasmidia sisältävä se täydentää kuutta tRNA:ta, jotka vastaavat harvinaisia ​​kodoneja (AUA, AGG, AGA, CUA, CCC ja GGA), jotka alun perin puuttuivat E. colista, mikä tarjoaa "universaalimman" proteiiniekspression.

Yhteenveto

Rekombinanttiproteiinien onnistuneen tuotannon kolme päätekijää ovat isäntä, vektori ja viljelyolosuhteet. Sopivin isäntä tulisi valita rekombinanttiproteiinin fysikaalis-kemiallisten ominaisuuksien, kunkin kannan ainutlaatuisten etujen ja kokeen erityistarpeiden ymmärtämisen perusteella. Lisäksi tekijät, kuten plasmidivektorit, lämpötila ja indusoijat, tulisi optimoida proteiinin ilmentymisen tehostamiseksi.

Yaohai Bio-Pharma etsii myös aktiivisesti institutionaalisia tai yksittäisiä globaaleja kumppaneita ja tarjoaa alan kilpailukykyisimmän palkkion. Jos sinulla on kysyttävää, ota rohkeasti yhteyttä: [email protected]